总芸苔素含量的液相色谱测定方法

摘要

本发明公开了一种总芸苔素含量的液相色谱测定方法，属于色谱分析检测技术领域。它包括苯硼酸类物标准品溶液的配制；芸苔素类物标准溶液的配制；天然芸苔素类物试样溶液的配制；在适当的条件下，使苯硼酸类物与所有具有邻羟基的芸苔素进行衍生化反应。本发明较好地解决了从天然物质中提取的芸苔素类物中芸苔素总量的测定，对科学地指导科研、生产和应用具有很大的意义和价值。适合对从天然物质中提取的芸苔素类物中芸苔素总量的测定。

主权项

1、一种总芸苔素含量的液相色谱测定方法，其特征在于，所用仪器、试剂、色谱条件、样品处理、测定及计算步骤如下：仪器：高效液相色谱仪；手动进样器；紫外-可见光检测器；数据处理机；试剂：甲醇或乙腈；乙酸乙酯(A.R)；芸苔素类物标准品；苯硼酸类物标准品；天然芸苔素类物和制剂；色谱条件：色谱柱：6.0mm I.d.×150mm不锈钢柱，内装CLC-C18填料；流动相组成体积比：甲醇(乙腈)∶水＝6090∶40～10；流速：0.7～1ml/min；检测波长：UV 222～270nm；柱温：室温；样品处理：(1)苯硼酸类物标准品溶液的配制：准确称取10.0mg苯硼酸类物标准品M1，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，转入25ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯定容为V1；(2)芸苔素类物标准品溶液的配制：准确称取15.0mg芸苔素类物标准品M2，准确称取10.0mg苯硼酸类物标准品M1，一并放入烧杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，转入25ml容量瓶中，于80℃水浴反应0.5h，冷却后，用甲醇或乙酸乙酯定容为V2；(3)天然芸苔素类物试样溶液的配制：固体试样配制：准确称取10.0mg苯硼酸类物标准品M1，按样品∶苯硼酸类物＝1.0～2.0∶1的比例，准确称取粉状样品M3，一并放入烧杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，转入25ml容量瓶中，于80℃水浴反应0.5h，冷却后，用甲醇或乙酸乙酯定容为V3；液体试样配制：准确吸取1.0～2.0ml液体样品M3放入烧杯中，在80℃水浴中蒸发至干，然后准确称取10.0mg苯硼酸类物标准品M1加入烧杯中，用甲醇或乙酸乙酯溶解后，转入25ml容量瓶中，于80℃水浴反应0.5h，冷却后，用甲醇或乙酸乙酯定容为V3；苯硼酸类物峰面积与质量关系的确定；(1)在色谱条件相同的情况下，准确吸取0.50ml苯硼酸类物标准品溶液V4，放入10ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯稀释至刻度V5，摇匀，取10μl进样V6，进行液相色谱测定，测出苯硼酸类物峰面积S1；(2)与苯硼酸类物标准品质量M1相当的峰面积Z1为：$Z1=\frac{S1\times V5\times V1}{V6\times V4}=\frac{S1\times 10\times 25}{10\times {10}^{-3}\times 0.5}=S1\times 50\times {10}^3$苯硼酸类物峰面积与芸苔素类物标准品的质量关系：(1)在色谱条件相同的情况下，准确吸取0.50ml芸苔素类物标准品溶液V7，放入10ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯稀释至刻度V8，并摇匀，取10μl进样V9，进行液相色谱测定，测出剩余苯硼酸类物的峰面积S2；(2)剩余的苯硼酸类物的总峰面积Z2为：$Z2=\frac{S2\times V8\times V2}{V9\times V7}=\frac{S2\times 10\times 25}{10\times {10}^{-3}\times 0.5}=S2\times 50\times {10}^3$(3)芸苔素类物标准品质量M2所消耗苯硼酸类物的总峰面积Z3为：Z3＝Z1-Z2＝(S1-S2)×50×103(4)芸苔素类物标准品质量M2与苯硼酸类物的峰面积的关系R1为：$R1=\frac{M2}{Z3}=\frac{M2}{(S1-S2)\times 50\times {10}^3}=\frac{M2}{(S1-S2)}\times 2\times {10}^{-5}$苯硼酸类物峰面积与天然芸苔素类物试样溶液的质量关系：(1)在色谱条件相同的情况下，准确吸取0.50ml天然芸苔素类物试样溶液V10，放入10ml容量瓶中，用甲醇或乙酸乙酯稀释至刻度V11，摇匀，取10μl进样V12，进行液相色谱测定，测出剩余苯硼酸类物的峰面积S3；(2)天然芸苔素类物试样溶液剩余苯硼酸类物的总峰面积Z4为：$Z4=\frac{S3\times V11\times V3}{V12\times V10}=\frac{S3\times 10\times 25}{10\times {10}^{-3}\times 0.5}=S3\times 50\times {10}^3$(3)天然芸苔素类物试样溶液中芸苔素类物消耗苯硼酸类物的总峰面积Z5为：Z5＝Z1-Z4＝(S1-S3)×50×103(4)天然芸苔素类物试样溶液中芸苔素类物相当于芸苔素类物标准品的质量A为：$A=R1\times Z5=\frac{M2\times 2\times {10}^{-5}}{(S1-S2)}\times (S1-S3)\times 50\times {10}^3=\frac{M2\times (S1-S3)}{(S1-S2)}$天然芸苔素类物试样中总芸苔素类物含量，按下式计算：$X=\frac{A}{M3}=\frac{M2\times (S1-S3)}{M3\times (S1-S2)}$式中：X-试样中总芸苔素类物含量，mg/g(固体样)或mg/ml(液体样)；M2-芸苔素类物标准品的质量，mg；M3-天然芸苔素类物试样的质量，g(固体样)或ml(液体样)；S1-苯硼酸类物标准品溶液测定中苯硼酸类物的峰面积；S2-芸苔素类物标准品溶液测定中剩余的苯硼酸类物的峰面积；S3-天然芸苔素类物试样溶液测定中剩余的苯硼酸类物的峰面积。