单链抗体的基于序列的工程改造和最优化

摘要

本发明提供了使用基于序列的分析和合理的(rational)策略修饰和提高单链抗体(svFv)的结构和生物物理特性包括稳定性、溶解性和抗原结合亲和力的方法。可单独地或组合地使用此类方法和策略。本发明的方法还包括数据库的用途，所述数据库包含来自实验筛选的抗体的scFv文库的scFv序列(其因具有优良的溶解性和稳定性而被选择)。本发明还提供了这样的方法，所述方法将针对此类被选择的抗体发现的特性用于重塑svFv抗体以提高单链抗体片段的稳定性和溶解性特性的一般方法。

主权项

1.鉴定单链抗体(scFv)中用于突变的氨基酸位点的方法，所述scFv具有VH和VL氨基酸序列，该方法包括：a)将scFv VH、VL或VH和VL氨基酸序列输入包含大量抗体VH、VL或VH和VL氨基酸序列的数据库以使scFv VH、VL或VH和VL氨基酸序列与数据库的抗体VH、VL或VH和VL氨基酸序列进行比对；b)将scFv VH或VL氨基酸序列中的氨基酸位点与数据库的抗体VH或VL氨基酸序列中的相应位点相比较；c)确定scFv VH或VL氨基酸序列中的氨基酸位点是否被在数据库的抗体VH或VL氨基酸序列中的相应位点上保守的氨基酸残基占据；和d)当氨基酸位点被在数据库的抗体VH或VL氨基酸序列中的相应位点上不保守的氨基酸残基占据时，将scFv VH或VL氨基酸序列中的该氨基酸位点鉴定为用于突变的氨基酸位点。