对多核苷酸模板进行测序的方法

摘要

本发明涉及对双链多核苷酸模板进行成对测序的方法，本方法导致依次测定多核苷酸模板上两个不同且分开的区域中的核苷酸序列。使用本发明的方法，有可能获得来自成簇阵列上每个双链模板的两个相连或配对的序列信息读取，而不是仅获得来自一条模板链的单个测序读取。

主权项

1.用于对靶标双链多核苷酸的第一和第二区域进行成对测序的方法，其中所述第一和第二区域在同一靶标双链多核苷酸上，该方法包括：(a)提供固体支持物，其上已固定有多个双链模板多核苷酸，其中每个都是由以5’端连接在所述固体支持物上的互补的第一和第二模板链所形成的；并提供能够与第一模板链的3’端杂交的一种或多种5’端固定的引物的多个拷贝；(b)对所述多个双链模板多核苷酸进行处理，以使第一模板链与5’端固定的引物杂交；(c)进行第一测序读取，以测定该模板多核苷酸中第一区域的序列；(d)进行延伸反应以延伸一个或多个所述固定的引物，从而复制第一模板链，以产生固定的第二模板链；(e)对第一和第二固定模板链进行处理，从而从固体支持物上除去第一模板链；(f)进行第二测序读取，以测定该模板多核苷酸中第二区域的序列，其中对所述靶多核苷酸中第一和第二区域的序列测定实现了对该靶双链多核苷酸中所述第一和第二区域的成对测序。