| 摘要 |
<p>Méthode de détection de l'internalisation d'une protéine transmembranaire d'intérêt exprimée à la surface d'une cellule comprenant les étapes suivantes : a) marquage de la protéine d'intérêt par un complexe métallique fluorescent dont la durée de vie est supérieure à 0,1 ms. b) ajout dans le milieu réactionnel d'un composé susceptible de provoquer l'internalisation de la protéine d'intérêt ; c) ajout dans le milieu réactionnel d'un agent modulateur choisi parmi : a. un composé accepteur de FRET fluorescent ou non-fluorescent, compatible avec ledit complexe métallique fluorescent, dont la concentration finale dans le milieu réactionnel est supérieure à 10-7 M; b. un agent réducteur dont le potentiel redox est inférieur à +0,1 V et de préférence compris entre 0,25 et 0,75 V ; c. un agent se liant de manière spécifique par liaison non covalente avec le complexe métallique fluorescent ; d. un ion métallique qui rentre en compétition avec la terre rare pour former un complexe métallique non-fluorescent ; d) mesure de la luminescence émise par le milieu réactionnel à la longueur d'onde d'émission du complexe métallique fluorescent et/ou à la longueur d'onde d'émission du composé modulateur lorsque celui-ci est un composé accepteur fluorescent ; e) comparaison du signal mesuré à l'étape d) avec un signal de référence mesuré sur des cellules ayant subit uniquement les étapes a) et c). Application : Méthode de détection de l'internalisation de protéines membranaires.</p> |
