一种具有多重特异性抗癌机制的溶瘤腺病毒突变体

摘要

本发明涉及一种具有多重抗癌机制的溶瘤腺病毒突变体，ntk生物医学领域。该腺病毒突变体Elb-55kDa和Elb-19kDa基因缺失，在其增殖必需基因E1a突变序列mE1a289R和mE1a243R之前插入由人端粒酶逆转录酶启动子核心序列和人肿瘤表皮生长因子受体增强子组成的嵌合启动子，使病毒能在癌细胞内特异性增殖，发挥病毒溶瘤作用以及mE1a蛋白抗癌作用，同时增加癌细胞对放化疗的敏感性，而对正常细胞没有影响。该病毒突变体基因组中插入了人内皮抑素基因表达盒，随病毒在癌细胞内复制，使内皮抑素基因扩增并在肿瘤内高效表达，抑制肿瘤新生血管形成，达到抑制癌细胞增殖及转移、诱导癌细胞凋亡的作用。该新型溶瘤腺病毒突变体在基因治疗中具有良好的临床应用前景，可用于多种人体肿瘤的治疗。

主权项

1.一种具有多重特异性抗癌机制的溶瘤腺病毒突变体，其特征是在人类5型腺病毒基因组的基础上，同时完全缺失E-lb-55kDa和Elb-19kDa蛋白的编码基因，将其增殖必需基因E1a突变为mE1a289R和mE1a243R序列，mE1a289R和mE1a243R突变序列由多核糖体进入位点IRES序列连接，在mE1a289R和mE1a243R序列之前插入一种肿瘤特异性嵌合启动子，以肿瘤特异性嵌合启动子用为顺式作用元件控制病毒增殖必需基因，该顺式作用元件插入增殖必需基因序列的转录起始位点与翻译起始位点ATG之间；所说的嵌合启动子由敲除了沉默子的人端粒酶逆转录酶启动子-304～+48bp核心序列和人肿瘤表皮生长因子受体基因的增强子组成，该病毒基因组还插入了血管内皮抑素基因的抗肿瘤基因表达盒；所说的增殖必需基因完整表达序列上游预置了内切酶BglII的基因克隆位点，下游预置了内切酶SalI和AccI的基因克隆位点；血管内皮抑素的编码核苷酸序列直接插入该溶瘤腺病毒突变体基因组中的外源基因克隆位点BalII；血管内皮抑素的编码核苷酸序列前插入M-成瘤蛋白信号肽编码序列；抗肿瘤基因表达盒中编码血管内皮抑素的编码核苷酸序列受人类巨细胞病毒CMV启动子的控制，该启动子插入血管内皮抑素的编码核苷酸序列的转录起始位点与翻译起始位点之间；所说的编码血管内皮抑素的核苷酸的加尾序列为SV40Poly A，插入血管内皮抑素的编码核苷酸序列的翻译终止密码子之后；所说的mE1a289R和mE1a243R的序列分别为：mE1a289R：atgagacatattatctgccacggaggtgttattaccgaagaaatggccgccagtcttttggaccagctgatcgaagaggtactggctgataatcttccacctcctagccattttgaaccacctacccttcacgaactgtatgatttagacgtgacggcccccgaagatcccaacgaggaggcggtttcgcagatttttcccgactctgtaatgttggcggtgcaggaagggattgacttactcacttttccgccggcgcccggttctccggagccgcctcacctttcccggcagcccgagcagccggagcagagagccttgggtccggtttctatgccaaaccttgtaccggaggtgattgatcttacctgctttccacccagtgacgacgaggatgaagagggtgaggagtttgtgttagattatgtggagcaccctggacacggttgcaggtcttgtcattatcaccggaggaatacgggggacccagatattatgtgttcgctttgctatatgaggacctgtggcatgtttgtctacagtcctgtgtctgaacctgagcctgagcccgagccagaaccggagcctgcaagacctacccgccgtcctaaaatggcgcctgctatcctgagacgcccgacatcacctgtgtctagggaatgcaatagtagtacggatagctgtgactccggtccttctaacacacctcctgagatacacccggtggtcccgctgtgccccattaaaccagttgccgtgagagttggtgggcgtcgccaggctgtggaatgtatcgaggacttgcttaacgagcctgggcaacctttggacttgagctgtaaacgccccaggccataa；mE1a243R：atgagacatattatctgccacggaggtgttattaccgaagaaatggccgccagtcttttggaccagctgatcgaagaggtactggctgataatcttccacctcctagccattttgaaccacctacccttcacgaactgtatgatttagacgtgacggcccccgaagatcccaacgaggaggcggtttcgcagatttttcccgactctgtaatgttggcggtgcaggaagggattgacttactcacttttccgccggcgcccggttctccggagccgcctcacctttcccggcagcccgagcagccggagcagagagccttgggtccggtttctatgccaaaccttgtaccggaggtgattgatcttacctgctttccacccagtgacgacgaggatgaagagggtcctgtgtctgaacctgagcctgagcccgagccagaaccggagcctgcaagacctacccgccgtcctaaaatggcgcctgctatcctgagacgcccgacatcacctgtgtctagggaatgcaatagtagtacggatagctgtgactccggtccttctaacacacctcctgagatacacccggtggtcccgctgtgccccattaaaccagttgccgtgagagttggtgggcgtcgccaggctgtggaatgtatcgaggacttgcttaacgagcctgggcaacctttggacttgagctgtaaacgccccaggccataa；所说的肿瘤特异性嵌合启动子的序列为：gcagggtgcgagacccaggcagaaacattttgctggatgaggaggaaagatgtaaggttgctccccttcagagacagcaaagggcaggtctgtagcttcacttacttcaggattgtgatttttgacagagccgagagatcagggttgttgaaccaggcctgaaggtcctagtgaatctcgtgaagagaggaggggtctggctgtaacatggacctagaggacatttttactgcaggagaaggaacagtggggatggggtggacttgccaaaggaatatagctcaagttcctgcagcccaaaaaagctcagtttcttttggccaaagcttcgcgcgggcggggaagcgcggcccagaccccgcggtccgcccggagcagctgcgctgtcggggccaggccgggctcccagtggattcgcgggatctcacagacgcccaggaccgcgcttcccacgtggcggagggactggggacccgggcacccgtcctgccccttcaccttccagctccgcctcctccgcgcggaccccgccccgtcccgacccctcccgggtccccggcccagccccctccgggccctcccagcccctccccttcctttccgcggccccgccctctcctcgcggcgcgagtttcaggcagcgctgcgtcctgctgcgcacgtgggaagccctggccccggccac；所说的血管内皮抑素的编码核苷酸序列为：Atgggggtacttgctcacacagaggacgctgctcagtctggtccttgcactcctgtttccaagcatggcgagccagcagccaccgcgacttccagccggtgctccacctggttgctgctcaacagccccctgtcaggcggcatgcggggcatccgcggggccgacttccagtgcttccagcaggcgcgggccgtggggctggcgggcaccttccgcgccttcctgtcctcgcgcctgcaggacctgtacagcatcgtgcgccgtgccgaccgcgcacgcgtgcccatcgtcaacctcaaggacgagctgctgtttcccagctgggaggctctgttctcaggctctgagggtccgctgaagcccggggcacgcatcttctcctttaacggcaaggacgtcctgaggcaccccacctggccccagaagagcgtgtggcatggctcggaccccaacggcgcaggctgaccgagagctactgtgagacgtggcggacggaggctccctcggccacgggcaggcctcctcgctgctgggggcaggctcctggggcagagtgccgcgagctgccatcacgcctacatcgtgctatgcattgagaacagcttcatgactgcctccaagtaatag。