春兰杂交种子与细菌共生萌发方法

摘要

一种春兰杂交种子与细菌共生萌发方法，共生萌发接种分三种情况进行：a.播种完种子后随即接种细菌，随即接种，可缩短种子萌发时间，种子萌发较早，萌发率高，萌发整齐；b.无菌播种效果不好，即一年以上无种子萌发，或种子萌发少，萌发不整齐时再接种细菌，只要种子没有丧失生活力，接种4个月至13个月，种子即开始大量萌发，持续萌发时间4～10个月；c.播种时同时采用无菌萌发和细菌共生萌发；对于容易萌发的杂交种子，可同时得到无菌中间繁殖体，便于进行无菌培养；而对于难萌发，或萌发效果不好的杂交种子，也可保证以最短时间获得理想的萌发效果；与细菌共生萌发后发育成的中间繁殖体即根茎状，可以带菌培养，也可以除菌后进行无菌培养。

主权项

1、一种春兰杂交种子与细菌共生萌发方法，所说的细菌是芽孢杆菌Bacillus sp，缩写为Bs细菌，其特征在于该方法的具体步骤如下：a.将人工授粉，果实生长七至九成熟的朔果从母株剪下，清理干净枯残花瓣，蘸洗衣粉水仔细刷洗，自来水下冲洗干净；超净工作台上用酒精棉球擦拭消毒，再浸入0.1％升汞液中消毒15～20分钟，无菌水洗两遍，无菌滤纸或纱布擦干蒴果表面水分；b.在超净工作台无菌器皿里切掉蒴果两头，沿蒴果脊线切开果壳，掰开取出种子，将种子均匀播种到事先准备好的1/2MS+蔗糖20g/L+AC 1g/L+琼脂粉8g/L，pH值5.6的固体培养基中；c.接种Bs细菌用1/2MS+土豆(50g/L)提取液+蔗糖20g/L，pH值5.6的液体培养基进行培养，常温保存90天仍有效，整个接种过程都在超净工作台上进行；d.处理接种完毕，置于温度23℃±3培养室的培养架上，在室内散射光下进行萌发，随时观察种子萌发情况，如果培养基水分蒸发，及时添加无菌水，获得与Bs细菌共生萌发发育成的中间繁殖体即根茎状。