分离人骨髓或脐带血干/祖细胞的试剂盒及其应用

摘要

本发明提供了一种分离人骨髓或脐带血干/祖细胞的试剂盒及其应用。本试剂盒是专门从人类骨髓或脐带血中分离、纯化有核细胞，本发明将代表非干/祖细胞的已知抗体，和骨髓和血浆中的成分混合，使得非干/祖细胞的比重由于细胞凝集而发生改变，然后采用自然沉降的方法，首先除去红细胞、血小板、全部的血浆物质，以及成熟的白细胞、淋巴细胞，保留Lin-细胞。干细胞/祖细胞的回收率≥85％，分离提取的干细胞/祖细胞存活率≥96％，分离、纯化过程能有效保留全部种类的干细胞。200豪升骨髓可获得的细胞总数一般在0.5～5.0×10⁹。200毫升的脐带血可获得的细胞总数在0.2～2.0×10⁹。

主权项

1.分离人骨髓或脐带血干/祖细胞的试剂盒，其特征在于，由如下的组分构成：试剂A 500毫升，试剂B 100毫升，试剂C 100豪升；所说的试剂A为生理盐水；所说的试剂B由如下体积比的组分组成：重量浓度6～9％羟乙基淀粉生理盐水溶液 100毫升混合抗体生理盐水溶液 100微升混合抗体生理盐水溶液中，混合抗体的含量为4～12微克/毫升；所说的混合抗体的组分和重量份为：抗CD 1份抗血型糖蛋白A(GlycophorinA)抗体(抗红细胞)2～4份；P9抗体或者P9F(ab’)2抗体片断2～5份所述的试剂C的组分和含量为：重量浓度为60％的碘克沙醇水溶液 22.7毫升PH7.0～7.6的细胞悬浮液 77.3毫升1)细胞悬浮液(PH7.0～7.6)氯化钠 0.85克100mM三胺储存液 10毫升加水 定容至100毫升2)100mM三胺储存液：三胺1.79克水100毫升以碘克沙醇水溶液、细胞悬浮培养液和氯化钠溶液的总体积计，三胺(Tricine)的含量为10mM/毫升。