一种检测白介素-6基因启动子区多态性位点的方法

摘要

本发明提供了一种检测白介素-6基因启动子区多态性位点的方法，它运用实时荧光PCR仪结合熔点分析在同一反应体系中实现了同时对白介素-6基因启动子区-572G/C，-597G/A两位点多态性的检测。本发明所述的方法与直接测序的检测方法相比，操作简单，成本低廉，结果判断直观，反应快速，并且每一反应都是闭管进行，有效减少了PCR污染的风险。

主权项

1、一种检测白介素-6基因启动子区多态性位点的方法，它包括下述步骤：(1)设计用于扩增含白介素-6基因-597G/A，-572G/C两位点的DNA片段的引物：正向引物：5’-AAAGGAGTCACACACTCC-3’；反向引物：5’-GCGTTCCAGTTAATTTGTATTTG-3’；(2)设计分别用于检测白介素-6基因启动子区-597G/A，-572G/C两位点的探针，并用不同的荧光素分别标记所述的两对探针：用于检测白介素-6基因启动子区-597G/A位点的探针为：检测探针：5’-CTGCCTGGCCACCCTCA-3’；锚定探针：5’-LC-Red 640-TTTCGTGCAGTTACTTCAAGGCGTCTCCAGG-3’；用于检测白介素-6基因启动子区-572G/C位点的探针为：检测探针：5’-ACAACAGCCCCTCACAGG-3’；锚定探针：5’-LC-Red 705-GAGCCAGAACACAGAAGAACTCAGATGACTG-3’；(3)PCR扩增，并进行荧光检测；(4)描绘熔点曲线；(5)根据得到的特征性熔点曲线，判断待测样品的基因型；(6)对所述的待测样品的基因型进行测序验证。