一种真菌制备草酸脱羧酶的方法

摘要

本发明涉及一种真菌制备草酸脱羧酶的方法，包括：(1)有机酸或无机酸溶液经过121℃高温湿热灭菌；(2)彩绒革盖菌(Trametes versicolor)或黑曲霉(Aspergillus niger)等真菌的液体培养基初始pH值约为5.0～5.5，反应温度20～25℃，通空气量为20～30L/L·h，在菌体生长的第三或第四天，快要进入对数生长期时开始添加上述的酸溶液，pH值0～3，用离心收集菌体细胞或过滤得到菌体细胞，用0.05～0.2M pH值为3～3.7的醋酸缓冲溶液淋洗后再次收集，冷冻，研磨菌丝，加入0.05～0.2M pH值为3～3.7的醋酸-醋酸钠缓冲液，继续研磨成糊状，离心得到草酸脱羧酶液。本发明简便易行，成本低，草酸脱羧酶活力是未加酸的8倍以上。草酸脱羧酶可广泛应用于医药、食品、饮料、造纸、农业、分析等方面。

主权项

1.一种真菌制备草酸脱羧酶的方法，包括下列步骤：(1)配制酸溶液浓度1mol/L～5mol/L的有机酸或无机酸溶液经过120～121℃高温湿热灭菌10～30min，或过滤除菌；(2)制备草酸脱羧酶彩绒革盖菌或黑曲霉液体培养基初始pH值为4.5～5.5，反应温度20～28℃，通空气量为20～30L/L·h，在菌体生长的第三或第四天，快要进入对数生长期时开始添加上述的酸溶液作为诱导剂，使彩绒革盖菌培养基pH值0～3或黑曲霉液体培养基pH值0～2，在培养过程中定期取样测酶活，至酶活最大时终止反应；用离心机于转速9000～12000rpm条件下离心20～30min收集菌体细胞，或通过过滤得到新鲜的菌体细胞，用0.05～0.2mol/L，pH值为3～3.7的醋酸缓冲溶液淋洗后再次收集，将得到的新鲜菌丝体用液氮迅速冷冻，研磨菌丝体成粉末状，加入0.05～0.2mol/L pH值为3～3.7的醋酸-醋酸钠缓冲液，继续研磨成糊状，离心机在12000rpm，离心20～30min，得到草酸脱羧酶液；其中，所述的真菌为彩绒革盖菌或黑曲霉。