高密度脂蛋白芯片电泳方法

摘要

本发明公开了一种高密度脂蛋白芯片电泳方法，包括选择缓冲体系、选择电泳芯片、血清标本及标记、电泳等步骤。本发明基于芯片电泳技术结合激光诱导荧光检测系统，在4分钟内分离了血清HDL的两种亚类，弥补了血液生化常规分析方法无法对HDL亚类进行分析的不足。芯片电泳对脂蛋白所表现出来的高分辨、快速的分离分析能力，使它有希望成为快速、简便、高效分离检测HDL亚类的分析手段之一。

主权项

1、一种高密度脂蛋白芯片电泳方法，其特征是：包括下列步骤：(1)选择缓冲体系：缓冲液为：由40mmol/LTricine、50mmol/L甲基葡胺、0.02mmol/L十二烷基硫酸钠组成，pH8.5；(2)选择电泳芯片：芯片包括十字管道，十字管道的横臂左右两端分别向垂直方向延伸，并分别与缓冲液废液池及缓冲液池相通，十字管道的纵臂上端与样品池相通，十字管道的纵臂下端与通过横向延伸段后与样品废液池相通；在十字管道的交叉处与缓冲液废液池之间的横臂上设置检测点；(3)血清标本及标记：受试者清晨空腹采血3mL，以3000r/min离心10min分离血清，所取血清标本加入同体积由0.05mol/L氯化镁和1.52mmol/L磷钨酸组成的PH为6.1的沉淀剂，混匀，置室温15min后3000r/min离心15min，离心后的上清液供测定；取离心后的6μL上清液加入2μL去离子水，再加入经乙二醇∶甲醇＝9∶1混合液预先溶解的4μL0.2g/LNBD C6-ceramide进行避光预染，1min后加入20μL样品缓冲液，作为电泳待测样品；(4)电泳：用1mol/LNaOH浸洗各池和通道1分钟，然后用去离子水浸洗2分钟；样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池加入缓冲液后，样品池中注入待测样本；进样阶段，样品池+670V，样品废液池接地，缓冲液池+300V，缓冲液废液池+450V，进样45秒后切换电压进入分离阶段；分离时，缓冲液废液池0V，缓冲液池+3500V，样品池和样品废液池均施加+300V，运行温度为25℃；得到高密度脂蛋白亚类HDL2、HDL3的出峰时间、相对含量数据。