一种流感病毒的培养方法

摘要

一种流感病毒的培养方法，用山羊胎儿肾细胞培养作为流感病毒培养的细胞源。采用细胞冻融提取物对鸡胚培养的流感病毒进行预处理，所述细胞冻融提取物是动物成纤维细胞、小鼠胚胎干细胞的上皮样分化细胞的冻融提取物。本发明培养的流感病毒其毒价显著高于用现行技术培养的流感病毒。所用细胞为原代细胞，用于疫苗生产不存在癌变物质危险性；所用细胞来源较广，获取成本较低；流感病毒的预处理不用胰蛋白酶，避免了胰蛋白酶对产毒细胞的影响。

主权项

1、一种流感病毒的培养方法，其特征是用山羊胎儿肾细胞作为流感病毒培养的细胞源，具体操作步骤如下：A、选取怀孕2-3月龄母山羊的胎儿肾脏，按照组织细胞原代培养方法，将羊胎儿肾组织制备培养成原代细胞；B、对采用鸡胚培养的流感病毒进行预处理；B1.细胞冻融提取物的制备：无菌环境下，将培养好的动物成纤维细胞或小鼠胚胎干细胞的上皮样分化细胞除去培养液，经两次冻融，让细胞充分破裂，成为细胞冻融碎片，培养瓶中按照每个100毫升瓶中加入3-5毫升的比例加入PBS溶液，吹打细胞培养面，将细胞冻融碎片吹入溶液中，将溶液吸入离心管内，经2500-3000转/分离心，取上清，经0.22微米过滤膜过滤除菌，即成细胞冻融提取物；B2.流感病毒的预处理：先将准备接种的鸡胚培养的流感病毒，用PBS溶液配成10倍于接种细胞所需浓度的病毒液，然后将该病毒液与上述冻融提取物按1∶1比例混合，静置5-10分钟，再进行接种；C、将预处理后的流感病毒接种于由羊胎儿肾组织培养成的原代细胞中，先按每个细胞瓶培养流感病毒所需培养基总量的1/4加入经预处理后的病毒液，37℃下，培养2-3小时后补足培养基，继续培养48-72小时，收集细胞培养液并在1500-2000转/分下离心10-20分钟取上清，得到含流感病毒的上清液。