麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶的定量检测方法

摘要

本发明涉及一种利用双抗体夹心酶联免疫吸附试验来定量检测麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶的方法，其定量检测方法是：它利用在制备抗麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶单克隆抗体的基础上，经过配对抗体的筛选，建立的双抗体夹心酶联免疫吸附试验，来定量检测麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶。为了克服免疫印迹法的不足，本发明提供一种麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶的定量检测方法，它不仅可以定量检测，而且特异性强、灵敏度高、重复性好、简便易行，非常适合于快速定量检测麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶及相应的融合蛋白。

主权项

1、麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶的定量检测方法，其定量检测方法是：在制备抗麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶单克隆抗体的基础上，经过配对抗体的筛选，建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验，来定量检测麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶；单克隆抗体的制备和双抗体夹心酶联免疫吸附试验的建立，是指将麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶作为免疫原，采用常规杂交瘤技术得到抗麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶的单克隆抗体，并常规标记辣根过氧化物酶，分别将未标记的单克隆抗体作为包被抗体，将标记的单克隆抗体作为酶标抗体，采用阵列法两两配对挑选敏感性最高且特异性最好的配对抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验的系统；双抗体夹心酶联免疫吸附试验的方法是在96孔板中，加入5mg/L包被抗体，24小时后用含牛血清白蛋白的缓冲液封闭96孔板，洗涤后加入待测标本和倍比稀释的麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶标准品，孵育及洗涤后加入酶标抗体，再次孵育及洗涤后以2，2’-连氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-磺酸)底物显色，于波长410nm测定光吸收值，以麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶标准品的光吸收值为纵坐标，相应浓度为横坐标，作标准曲线，根据待测标本的光吸收值，经曲线拟合或换算，得出待测标本中麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽S转移酶的浓度。