发明名称 |
一种农杆菌介导的甘薯不定芽转化方法 |
摘要 |
本发明公开了一种农杆菌介导的甘薯不定芽转化方法。该方法包括以下步骤:(1)无菌苗的获得及培养,(2)甘薯茎段的预培养,(3)菌株的活化剂菌液的制备,(4)农杆菌侵染和共培养,(5)农杆菌脱菌及不定芽再生,(6)甘薯小芽的分割及生根,(7)转基因植株的筛选,(8)检测及移栽。本发明提出了一个甘薯遗传转化的新方法,以甘薯茎段为外植体,通过对其侵染及诱导不定芽获得转基因植株,适用于多种基因型,且再生速度快,是一个能够用于甘薯转基因育种的可靠体系。 |
申请公布号 |
CN101608188A |
申请公布日期 |
2009.12.23 |
申请号 |
CN200910017332.X |
申请日期 |
2009.07.27 |
申请人 |
山东大学 |
发明人 |
向凤宁;王鹏;赵珠 |
分类号 |
C12N15/82(2006.01)I;A01H4/00(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/82(2006.01)I |
代理机构 |
济南金迪知识产权代理有限公司 |
代理人 |
王绪银 |
主权项 |
1、一种农杆菌介导的甘薯不定芽转化方法,步骤包括无菌苗快繁,以甘薯茎段为受体的遗传转化,不定芽再生及小苗生根,抗生素筛选和小苗移栽,其特征在于:所述以甘薯茎段为受体的遗传转化方法是:将培养20-30天的甘薯无菌小苗剪去叶片及根,将茎切成0.5-1厘米的小段,每段含1-2个节,将茎段沿侧芽所在的轴线纵向切成两半,并切去可见的侧芽;再将经过上述处理的甘薯茎段切面向下置于固体培养基上,22℃-25℃下暗培养3天;然后将上述暗培养的甘薯茎段在OD600为0.6-1.0的农杆菌悬液中侵染10-15分钟,而后用无菌滤纸吸去菌液,切面朝下置于继代培养基上,23℃-25℃下暗培养5天;所述不定芽再生及小苗生根的方法是:将上述暗培养5天的甘薯茎段用无菌水清洗3-4次,再用无菌滤纸吸干,转接至不定芽诱导培养基上,在23℃-25℃、且每日光照14小时条件下,连续培养20±2天,分化出不定芽;当甘薯茎段上的不定芽长至1厘米时,将小芽单独剪下,转移到生根培养基上,在23℃-25℃、且每日光照14小时条件下,培养14±1天,进行生根;所述抗生素筛选的方法是:将已生出1-2cm根的甘薯小苗不伤及根部取出,转接到含相应抗生素的筛选培养基上,在23℃-25℃、且每日光照14小时条件下,培养14±1天;其中所述筛选培养基配方为:MS+0.1-1.0mg/L NAA(萘乙酸)+20g/L蔗糖+7g/L琼脂,并添加200mg/L头孢噻肟钠和25mg/L卡那霉素,pH5.8。 |
地址 |
250100山东省济南市历下区山大南路27号 |