| 主权项 |
1.一种核 酸序列,其至少包括下列之一:溶脂蓍草 菌( Yarrowia lipolytlca)之LEU2基因,由下列核 酸序列组 成:溶脂蓍草菌之LEU2基因之启动子序列,由下列核 酸 序列组成:溶脂蓍草菌之LEU2基因之终结子序列,由 下列 核 酸序列组成:溶脂蓍草菌之XPR2基因,由下列核 酸 序列组成:溶脂蓍草菌之XPR2基因信号序列之核 酸 序列 编码,由下列组成:溶脂蓍草菌之XPR2 pro1序列之核 酸序列编码,由下列组成:溶脂蓍草菌之XPR2 pro2序 列 之核 酸序列编码,由下列组成:溶脂蓍草菌之XPR2 其 因之启动子序列,由下列核 酸序列组成:溶脂蓍草 菌之 XPR2基因之终结子序列,由下列核 酸序列组成:2.一 核 酸序列:3.一核 酸序列:4.一核 酸序列:5.一种制 造质体pLS-3之方法,其包括:(a)将得自pLD 90 之870个硷基对HindIII-AvaI DNA片段与下列接 酸序列 接合(b)由(a)之接合产物中分离出916个硷基对Hind III- Bam HI DNA片段;及(C)将得自pterm 4之7.3 kb HindIII -Bcl I DNA片段与(b)之片段及得自pPFZ-84A之1080个硷 基对Bcl I-Bam HI(部份)DNA片段接合。6.一种制造质体 pXHP-24之方法,其包括:(a)将得自pLD- 86之2.3kb EcoRI-BamHI(部份)片段与下列核 酸序列接 合(b)以HindIII消化(a)之接合产物;及(c)将(b)之消化 产物与HindIII消化之pBR322接合。7.一种制造质体pC5 aX-3之方法,其包括(a)将得自pC5a- 48之约220硷基对Hinf I-Hind III DNA片段与下列核 酸 序列接合:(b)将得自(a)之接合产物与AvaI-HindIII消化 DNA片段与得自pXHP-24之1150个硷基对HindIII-AvaI DNA 片段接合;及(c)将得自(b)之接合产物之约1.4kbHindIII 消化之DNA片段与HindIII消化之pterm 4接合。8.一种制 造质体pLD 56之方法,其包括(a)接合EcoRI消化 之pLD 51;及(b)选择较pLD 51小之质体。9.一种制造质 体pLX-34之方法,其包括:(a)将得自pLD 40之300 bp HindIII-FokI DNA片段与下列核 酸序列接 合(b)由(a)之接合产物分离约360 bpHindIlI消化之DNA片 段;及(c)将(b)之约360 bp HindIII DNA片段与得自pXX- 33之887个硷基对之BglI-XmaI DNA片段及得自pXX-33之约 8.0kb HindIII-XmaI DNA片段接合。10.一种制造凝乳 原 之方法,其包含在合宜营养介质内 培养溶脂蓍草菌转形体,其包含携带质体pXX-33之溶 脂蓍 草菌ATCC 20774之转形体,该转形体具ATCC 20780之监识 特征。11.一种制造凝乳 原之方法,其包含在合宜 营养介质内 培养溶脂蓍草菌转形体,其包含携带质体pXX-22之溶 脂蓍 草菌ATCC 20774之转形体,该转形体具ATCC 20779之监识 特征。12.一种制造凝乳 原之方法,其包含在合宜 营养介质内 培养溶脂蓍草菌转形体,其包含携带质体pXX-11之溶 脂蓍 草菌ATCC 20774之转形体,该转形体具ATCC 20778之监识 特征。13.一种制造人类过敏毒素C5a之方法,其包含 在合宜营养 介质内培养溶脂蓍草菌转形体,其包含携带质体pC5 aX-3 之溶脂蓍草菌ATCC 20774之转形体,该转形体具ATCC 20777之监识特征。14.根据申请专利范围第13项制造 人类过敏毒素C5a之方法 ,其中溶脂蓍草菌转形体为ATCC 20777。15.一种检测 载体DNA整合于XPR2基因之溶脂蓍草菌转形体 之方法,其包含(i)以未切割之质体PLS-3 DNA或以SnaBI 消化之pLS-3 DNA转形溶脂蓍草菌之XPR+菌株;及(ii)筛 检(i)所产生丧失硷性蛋白 活性之转形体。16.根据 申请专利范围第15项之方法,其中该溶脂蓍草菌 为溶脂蓍草菌ATCC 20688。17.一种制造溶脂蓍草菌转 形体之方法,其包含将表现载 体整合至溶脂蓍草菌转形体内,其包含具NruI切割 之pLX- 34之溶脂蓍草菌ATCC 20794之转形体。18.一种制造凝 乳 原之方法,其包含在合宜营养介质内 培养溶脂蓍草菌转形体,其包含具NruI切割之pLX-34 之溶 脂蓍草菌ATCC 20794之转形体,该辅形体具ATCC 20795之 监识特征。19.一种制造凝乳 原之方法,其包含在 合宜介质内培养 溶脂蓍草菌转形体,其包含pLD56与其整合,该PLD56包 括 一与pLX-34同源之区域与其整合。20.根据申请专利 范围第10项制造凝乳 原之方法,其中 溶脂蓍草菌转形体为ATCC20780。21.根据申请专利范 围第11项制造凝乳 原之方法,其中 溶脂蓍草菌转形体为ATCC20779。22.根据申请专利范 围第12项制造凝乳 原之方法,其中 溶脂蓍草菌转形体为ATCC20778。23.一种制造不产生 硷性蛋白 之溶脂蓍草菌转形体之方 法,该方法包含使用未切割之质体pLS-3 DNA或以SnaBI 消 化之pLS-3 DNA转形溶脂蓍草菌XPR+菌株。24.一种制造 溶脂蓍草菌转形体之方法,包含将pLX-34整 合入包含有pLD 56整合于其中之溶脂蓍草菌转形体 内,该 pLD 56含一与该pLX-34同源之区域。25.一种制造凝乳 原之方法,包含在合宜营养介质内培 养具有ATCC20795识别特征之溶脂蓍草菌转形体。26. 一种制造质体pXX33之方法,包含:使用HindⅢ-AvaI 切割质体pXHP-24而产生1150bp片段,分离该片段,将该 片段与合成DNA片段在T4接合 存在下接合,使用Hind Ⅲ- BamHI切割如此产生之接合产物而产生1196bp片段,分 离 该1196bp片段,将该1196bp片段与经由BamHI-XmaI切割 质体pLS3所得之440bp片段及经由Hind Ⅲ-Xma I切割质 体pLS3所得之约 8.0bp片段在T4接合 的存在下接合,使用如此所得之 接 合产物转形大肠杆菌,选出安比西林抗药性转形体 及从该 转形体内分离质体pXX33。27.一种制造质体pXX22之方 法,包含:以HindⅢ-Bgl Ⅱ 切割质体pXHP 24而产生890bp片段,分离该片段,在T4接 合 存在下将该片段与合成DNA片段接合,以HindⅢ- BamH I切割如此所产生之接合产物两产生920 bp片段,分 离该 920bp片段,将该920bp片段与经由BamHI-XmaI切割质体 pLS3所得之440bp片段及经由HindⅢ-XmaI切割质体pLS3 所得之约 8.0bp片段在T4接合 的存在下接合,使用如此所得之 接 合产物转形大肠杆菌,选出安比西林抗药性转形体 及从该 转形体内分离质体pXX22。28.一种制造质体pXX11之方 法,包含:使用HindⅢ-BglⅡ 切割质体pXHP-24而产生750bp片段,分离该片段,将该 片 段与合成DNA片段在T4接合 存在下接合,使用HindⅢ- BamHⅠ切割如此所产生之接合产物而产生790bp片段, 分 离该790bp片段,将该790bp片段与经由BamHI-XmaI切割 质体pLS3所得之440bp片段及经由HindⅢ-XmaI切割质体 pLS3所得之约 8.0bp片段在T4接合 的存在下接合,使用如此所得之 接 合产物转形大肠杆菌,选出安比西林抗药性转形体 及从该 |
