发明名称 |
从牛初乳中分离乳腺上皮细胞的体外培养方法 |
摘要 |
本发明公开了一种从牛初乳中分离乳腺上皮细胞的体外培养方法。针对目前乳腺上皮细胞体外培养方法中存在的组织取材不易、培养成功率低等问题,我们采用从泌乳2-7天的牛初乳中分离培养乳腺上皮细胞,进行原代培养。培养液为:RPMI-1640,添加胎牛血清20%、胰岛素1μg/ml、醋酸钠5mM、转铁蛋白10μg/ml、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml等,培养条件为37℃,5%CO<sub>2</sub>。细胞接种在胶原包被的培养瓶内,经过15-18天培养,细胞可铺满瓶子底壁,并可传代。用角蛋白-18抗体对所培养细胞进行免疫组化鉴定,结果呈阳性,证明所培养细胞系确为乳腺上皮细胞。用ELLISA和RT-PCR方法从原代培养的牛乳腺上皮细胞中均检测到了β-酪蛋白,表明所培养的乳腺上皮细胞具有泌乳功能,可用于多种体外研究。 |
申请公布号 |
CN101591636A |
申请公布日期 |
2009.12.02 |
申请号 |
CN200810072887.X |
申请日期 |
2008.05.26 |
申请人 |
新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心 |
发明人 |
李文蓉;谭立新;牛志刚 |
分类号 |
C12N5/06(2006.01)I |
主分类号 |
C12N5/06(2006.01)I |
代理机构 |
|
代理人 |
|
主权项 |
1、一种从牛初乳中分离和培养乳腺上皮细胞的培养液,包括各种培养成份含量是RPMI-164075-80%、胎牛血清20%、胰岛素1ug/ml、醋酸钠5mM、转铁蛋白10ug/ml、青霉素100U/ml、链霉素100ug/ml。 |
地址 |
830000新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市克拉玛依东街151号 |