构建分泌细菌重组蛋白的前导肽

摘要

本发明提供分离前导肽的方法，前导肽能指导异源蛋白质从细菌细胞质中输出。此方法取决于从推定前导肽或前导肽突变体的文库筛选可迅速输出的序列，因此能保护细胞质中短寿报告蛋白不受降解。本文鉴定的突变前导肽显示提供稳态水平显著更高的输出，不仅用于短寿报告蛋白，也用于其它稳定的长效蛋白质。这些前导肽可用于指导或提高蛋白质分泌。本发明进一步揭示经Tat途径输出细胞质折叠的蛋白质。具二硫键的蛋白质首先在适当氧化突变菌株的细胞质内折叠。这种细胞质预折叠的蛋白质含二硫键，随后经Tat途径输出。

主权项

1.一种在细胞中生成生物活性异源多肽的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：a)构建表达盒，包括将编码前导肽的核酸序列置于编码所述生物活性异源多肽的核酸序列上游，所述前导肽指导所述生物活性异源多肽经双精氨酸易位途径输出；和b)所述表达盒在细菌细胞中表达，其中所述生物活性异源多肽以生物活性形式生成；其中，所述细菌细胞有氧化细胞质，所述细胞分泌至少一种生物活性异源多肽，所述异源多肽含2到17个二硫键。