脱细胞结膜基质的制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种作为组织工程角膜支架材料的脱细胞结膜基质的制备方法和应用。本发明首次将球结膜中的细胞成份除去，制备出脱细胞结膜基质，并以其作为组织工程角膜支架，兔角膜上皮或内皮细胞可在支架上形成良好的细胞单层，构建出组织工程角膜上皮或内皮，并成功移植于兔动物模型眼上。本发明所构建的组织工程角膜降解时间较长，兔眼对其无明显免疫排斥反应，且对角膜缘干细胞缺乏或角膜内皮细胞功能失代偿的治疗效果均显著。本发明制备方法简单；生物相容性好；抗原性很低；种子细胞容易在其上生长和增殖；降解较慢；在培养过程中和移植后始终保持其透明度；且球结膜来源广泛，具有广阔的应用开发前景。

主权项

1、脱细胞结膜基质的制备方法：(1)取屠宰场的新鲜猪眼球，用PBS反复冲洗后，剪去球周组织，再剪下球结膜；或眼库中人的球结膜，置于含妥布霉素1000U/ml的PBS中浸泡30分钟；(2)在超净台内于光学体视显微镜下将上述球结膜的Tenon囊尽量剪除干净，并用PBS冲洗，放于体积分数为0.2％戊二醛溶液中5分钟以进行交联保护；(3)再用PBS冲洗，以去除残留的戊二醛溶液；(4)然后对球结膜进行脱细胞处理，在37℃恒温摇床上用体积分数为1％tritonX-100作用24小时，在37℃，co2浓度为5％的培养箱中，质量体积分数为0.25％胰酶和0.02％EDTA作用2小时，用PBS震荡冲洗10分钟，放在超净台内通风干燥，两面紫外消毒各30分钟，得到脱细胞结膜基质。