一种制备葡激酶的方法

摘要

本发明公开了一种表达和制备葡激酶(Staphylokinase，SAK)的方法，包括：1、葡激酶融合蛋白表达工程菌构建：构建含有SEQ NO.1的基因序列的重组质粒，并将重组质粒导入大肠杆菌，得到发酵菌种。2、制备方法包括：a、工程菌发酵表达具有如SEQ NO.2的氨基酸序列的可溶性融合蛋白；b、将步骤a的融合蛋白用镍离子亲和凝胶柱吸附，提取融合蛋白；c、将步骤b融合蛋白用肠激酶酶切后，适当稀释，过b步骤凝胶柱，收集穿透液；d、将步骤c穿透液经超滤浓缩后，过Q凝胶柱得葡激酶原液。本发明方法步骤简便、可靠，特别适于规大模化生产。本发明方法得到的葡激酶纯度高、比活高，具有良好的溶栓活性；为生产药用葡激酶提供了一种新途径。

主权项

1、一种制备葡激酶的方法，其特征在于：该方法包括a、通过基因工程方法，得到包含如SEQ NO.2所示的氨基酸序列的可溶性融合蛋白的发酵产物；b、分离纯化步骤a得到的融合蛋白：先用金属镍离子亲和凝胶柱吸附，并用洗脱液洗脱，得到洗脱产物，所述的洗脱产物含有如SEQ NO.2所示的氨基酸序列的可溶性融合蛋白；c、将步骤b融合蛋白用肠激酶酶切后适当稀释，过b步骤所述的凝胶柱，收集穿透液；d、将步骤c穿透液经超滤浓缩后，过Q凝胶柱得葡激酶原液。