利用位点特异性重组生产重组病毒的高通量系统

摘要

本发明公开了使用体外位点特异性重组生产重组病毒的方法。本发明中，在体外将环形病毒基因组DNA消化成线形的病毒基因组DNA，并使之和旁侧有位点特异性重组酶位点的所需基因组物质发生位点特异性重组。根据本发明，由于位点特异性重组混合物可以应用于宿主细胞，而不需要进一步选择重组病毒基因组DNA的步骤，有可能同时快速获得多种重组病毒。因此，本发明可以用做高通量系统，用于生产及筛选上百种或上千种重组病毒。

主权项

1.一种制备含有所需基因组物质的表达性环形重组病毒载体的方法，包括下列步骤：i)提供线形形式的病毒基因组DNA，其通过用限制酶消化环状病毒基因组DNA并使两个末端的旁侧为位点特异性重组酶识别碱基序列而进行处理以防止两个末端重组；ii)提供含所需基因组物质的基因序列盒，所述基因组物质两个末端的旁侧为位点特异性重组酶识别碱基序列，其与i)的线形形式的病毒基因组DNA两个末端旁侧的位点特异性重组酶识别碱基序列反应；iii)在位点特异性重组酶存在下在体外使i)的线形形式病毒基因组DNA与ii)的基因序列盒反应。