| 摘要 |
1. Способ получения человеческих стволовых клеток, включающий в себя ! а) партеногенетическую активацию человеческого ооцита, где активация включает в себя i) контактирование ооцита с ионофором при высоком давлении кислорода (О2) и ii) контактирование ооцита с ингибитором серин-треониновой киназы при низком давлении О2; ! b) культивирование активированного ооцита со стадии а) при низком давлении О2 до формирования бластоцисты; ! с) перенос бластоцисты на слой питающих клеток и культивирование перенесенной бластоцисты при высоком давлении О2; ! d) механическое отделение клеточной массы внутренней области (ICM) от трофэктодермы бластоцисты со стадии с); и ! е) культивирование клеток ICM со стадии d) на слое питающих клеток, ! где стадию (е) культивирования ICM проводят при высоком давлении О2. ! 2. Способ по п.1, в котором низкое давление О2 поддерживают путем инкубации в среде газовой смеси, содержащей О2 в концентрации, примерно составляющей от 2% О2 до 5% О2. ! 3. Способ по п.2, в котором среда газовой смеси дополнительно содержит примерно 5% СО2 и примерно от 90% N2 до 93% N2. ! 4. Способ по п.1, в котором высокое давление О2 поддерживают путем инкубации в среде газовой смеси, содержащей примерно 5% СО2 и примерно 20% О2. ! 5. Способ по п.1, в котором ионофор выбран из группы, состоящей из иономицина и А23187. ! 6. Способ по п.1, в котором ингибитор серин-треониновой киназы выбран из группы, состоящей из стауроспорина, 2-аминопурина, сфингозина и 6-диметиламинопурина (DMAP). ! 7. Способ по п.1, в котором среда содержит сыворотку крови из пупочного канатика человека. ! 8. Способ по п.1, в котором слой питающих клеток содержит человеческие фибробласты. ! 9. Способ по п.8, в котором |
