一次性测定生物体中十种氨基类生物活性物质的方法

摘要

本发明属生物化学检测领域，特别是涉及神经内分泌免疫网络生物活性分子的测定，尤其是生物体中(如血液或脑组织)氨基类生物活性物质的测定方法。具体公开了一种一次性测定生物体中十种氨基类生物活性物质的方法，在75分钟内以丹酰氯为衍生试剂一次性测定生物体中肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、五-羟色胺(5-HT)、组胺(HA)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)和三碘甲状腺原氨酸(T₃)十种氨基类生物活性物质。本发明方法简便快速，可灵敏地测定生物体液中这十种物质的浓度，适用于需要全面分析生物体中这十种物质的研究。

主权项

1、一次性测定生物体中十种氨基类生物活性物质的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：将生物体液经去蛋白处理后，加入KHCO3溶液调PH值后，再加入和调PH后溶液体积相同的、浓度为2-10mg/ml的丹酰氯进行衍生化反应，反应温度为80℃水浴，反应时间为20分钟；利用高效液相色谱仪和荧光检测器完成生物体液中肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、五-羟色胺、组胺、谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸、甘氨酸和三碘甲状腺原氨酸十种氨基类生物活性物质的检测，其中，色谱条件为：色谱柱：Hypersil ODS(C18)色谱柱，型号250×4.6mm，5μm；流动相：流动相B是甲醇∶乙腈＝2∶3；流动相A是20mmol/l的醋酸盐缓冲液，其中加入3mmol/l的辛烷磺酸钠，0.1mmol/l的Na-EDTA，并用氢氧化钠调至pH值4.8，用0.45um微孔滤膜过滤；流速：1ml·min-1；柱温：30℃；荧光检测器的激发波长为350nm，发射波长为510nm。