主权项 |
1、一种类肝素的制备方法,其特征是该方法包括以下步骤:a、将健康动物的带软骨的肺投入反应罐中,加入投入肺的重量0.5~1.5倍的水,再加入投入水的重量2%~4%的氯化钠,浸泡8~12小时;b、升温至50~60℃,调节pH值为8.0~8.5,加入原料重量0.2%~1%的胰酶,酶解8~12小时,然后调节pH值为6.0~7.0,升温至80~85℃,保温30分钟使酶灭活,过滤,分离上清液和沉淀;c、上清液调节pH值为9.0~9.5,添加1.5~2.5%W/V的氯化钙,反应30分钟,添加1.5~2.5%W/V的碳酸钠继续反应30分钟,过滤;d、滤液调节pH值为6.0~7.0,添加乙醇至溶液乙醇浓度在20℃条件下为60%,收集沉淀;e、用纯化水溶解沉淀使浓度至20~40%W/V,添加1.5%W/V的氯化钠及1.5%V/V的过氧化氢,调节pH值为9.5~10.5,反应24小时,过滤;f、滤液调节pH值为6.0~7.0,添加乙醇至乙醇浓度在20℃条件下为60%,进行乙醇沉淀,收集沉淀,用乙醇洗涤,干燥得类肝素粗品;g、类肝素粗品加3~5倍量甲酰胺,溶解,另将1~2倍量氯磺酸和2~5倍量甲酰胺预先混合,将类肝素粗品的甲酰胺溶液加入至氯磺酸-甲酰胺溶液中,20~30℃反应4~8小时;h、加入4倍体积的乙醇终止反应,过滤,收集沉淀;i、用纯水溶解沉淀使浓度至20~40%W/V,添加1.5%W/V的氯化钠及1.0%V/V的过氧化氢,调节pH值为9.5~10.5,反应24小时,过滤;j、滤液加3倍体积乙醇沉淀,收集沉淀物用无水乙醇洗涤2~4遍,干燥,得类肝素产品。 |