一种针对PKCγ基因RNA干扰的重组慢病毒载体的构建及其应用

摘要

本发明涉及一种针对PKCγ基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其构建和应用。实验构建了针对PKCγ基因的ShRNA的慢病毒载体，将合成的针对ShRNA的DNA片段通过慢病毒载体介导，还与pHelper 1.0、pHelper 2.0两种载体共转染293T细胞培养，获得重组慢病毒载体后，转染目的细胞，实现针对PKCγ基因的RNA干扰。采用的自身失活的第三代慢病毒载体(SIN)，具有安全可靠、可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长时程表达、免疫反应小等优点，是一种理想载体。本发明的慢病毒载体，对大鼠原代培养神经元干扰效果达85％以上，因此本发明重组慢病毒载体可能成为慢性神经病理性疼痛基因治疗的有力工具。

主权项

1、一种针对PKCγ基因RNA干扰的重组慢病毒载体，是自身失活的第三代慢病毒载体SIN，其特征在于，所述的载体SIN含有pGCSIL-GFP/U6-Sh PKCγ重组载体，所述的pGCSIL-GFP/U6-Sh PKCγ重组载体是在pGCSIL-GFP载体的MCS中连接了针对ShRNA的双链DNA片段；所述的双链DNA片段为以下序列中的一种：PSCSI625：5’-CCGGCAGAAGACAAAGACCGTGAAATTCAAGAGATTTCACGGTCTTTGTCTTCTGTTTTTG-3’3’-GTCTTCTGTTTCTGGCACTTTAAGTTCTCTAAAGTGCCAGAAACAGAAGACAAAAACTTAA-5’PSCSI626：5’-CCGGGAAGTTTGAGGCCTGTAATTATTCAAGAGATAATTACAGGCCTCAAACTTCTTTTTG-3’3’-CTTCAAACTCCGGACATTAATAAGTTCTCTATTAATGTCCGGAGTTTGAAGAAAAACTTAA-5’PSCSI627：5’-CCGGAACTCTATGCCATCAAGATACTTCAAGAGAGTATCTTGATGGCATAGAGTTTTTTTG-3’3’-TTGAGATACGGTAGTTCTATGAAGTTCTCTCATAGAACTACCGTATCTCAAAAAAACTTAA-5’PSCSI628：5’-CCGGCAGACTACATAGCACCTGAGATTCAAGAGATCTCAGGTGCTATGTAGTCTGTTTTTG-3’3’-GTCTGATGTATCGTGGACTCTAAGTTCTCTAGAGTCCACGATACATCAGACAAAAACTTAA-5’。