| 摘要 |
La invencion se refiere a un procedimiento para la preparacion de muteínas de polipéptidos eucariotas en células eucariotas por medio de recombinacion homologa. Además, se refiere a un procedimiento para la preparacion de células humanas, las cuales son adecuadas para la preparacion de proteínas mutadas humanas. Finalmente, la invencion se refiere a células humanas preparadas de acuerdo con el procedimiento y las proteínas humanas mutadas que se pueden obtener por el mismo así como también preparados farmacéuticos que contienen estas muteínas. Reivindicacion 1: Procedimiento in vitro para la produccion de muteínas de polipéptidos eucarioticos, caracterizado porque (i) en células eucarioticas, que contienen una secuencia de ácido nucleico blanco que codifica un polipéptido blanco endogeno, se introduce una molécula de ácido nucleico capaz de recombinacion homologa, donde dicha molécula de ácido nucleico comprende: a) dos secuencias flanqueantes que tienen cada una de ellas, una longitud de al menos 150 bp, que son homologas a las secuencias en el locus del gen de la secuencia de ácido nucleico blanco y, comparada con la secuencia de ácido nucleico blanco endogeno, tienen una mutacion en la region codificante del polipéptido blanco maduro y b) un fragmento de ácido nucleico que codifica un marcador de seleccion, ii) se cultivan las células en condiciones tales que se produce recombinacion homologa de la molécula de ácido nucleico introducida, mediante lo cual la célula contiene una secuencia de ácido nucleico blanco mutada después de la recombinacion homologa que es capaz de expresar una muteína del polipéptido blanco, iii) se seleccionan las células en las cuales ha tenido lugar una recombinacion homologa, y iv) se aísla la muteína a partir de las células y/o del sobrenadante celular.
|
