可修复仔猪胰岛细胞的生产方法

摘要

一种可修复仔猪胰岛细胞的生产方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：(1)供体的选择：供体选择刚出生、未哺乳健康仔猪，无菌下开腹取胰腺，去除包膜、血管、结缔组织并置4℃ Hank`s液中；(2)胰岛细胞分离及纯化：通过机械研磨使胰岛与外分泌组织分离。再通过Dextran不连续密度梯度离心，得到胰岛细胞；(3)胰岛细胞培养：应用无血清微球载体进行CO₂培养，采用RPMI-1640培养液，并加入纤维连接蛋白，在培养过程中，将胰岛细胞包于APA生物膜内形成微球，在恒温37℃、CO₂培养箱内培养，48小时换一次培养液，最终得到活性好、纯度高的微囊新生仔猪胰岛细胞。

主权项

1、一种可修复胰岛细胞的生产方法，其特征在于：它包括以下工艺步骤：(1)、胰岛细胞供体的选择：供体选择刚出生、未哺乳健康小猪胰腺，经去除包膜、血管、结缔组织并置4℃ Hank′s液中；(2)、胰岛细胞的分离及纯化：通过机械研磨使胰岛与外分泌组织分离，再通过Dextran不连续密度梯度离心，得到胰岛细胞，取样镜检形态、活性纯度、数量、成活率，从分离到纯化结束时间控制在4-6小时；(3)、胰岛细胞的培养：将胰岛细胞包于海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠生物膜内形成微囊，在恒温37℃CO2培养箱内培养，采用RPMI-1640培养液，培养液中不含牛血清，并加入纤维连接蛋白，加入量按培养基体积每升加纤维连接蛋白5-30mg，48小时换一次培养液，在培养过程中，定期取培养液测定胰岛素含量；观察记录胰岛细胞在微囊内分化、生长、分泌胰岛素功能来判定终止培养时间，最终得到活性好、纯度高的微囊新生猪胰岛细胞。