一种检测牛腺病毒3型的荧光定量PCR试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种检测牛腺病毒3型的荧光定量PCR试剂盒及应用，该试剂盒含有：a)DNA提取试剂，b)热启动Taq DNA聚合酶，c)引物和TaqMan探针，d)标准阳性DNA模板，e)PCR荧光定量反应液，其特征是：引物序列分别为正义引物：5′-CCTGAATTCTCTTGCAGCCAGA-3′，反义引物：5′-CCTACCGAACCGACGCAGAT-3′，扩增子大小为100bp，荧光探针序列为：5′-FAM-TGAGAAGGTACTCCTCGTCGCTGGACCA-TAMRA-3′，探针的5′端标记荧光发射基团FAM，靠近3′端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入腺病毒3型pol蛋白100bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒制备，并于紫外分光光度计测A₂₆₀定量并10倍梯度稀释。高效方便地对血清制品中的牛腺病毒3型污染进行实时监控，可广泛用于该病毒感染的流行病学调查，还能为相关基础研究提供技术支持，应用前景十分广泛。

主权项

1、一种检测牛腺病毒3型的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒含有：a)DNA提取试剂，b)热启动Taq DNA聚合酶，c)引物和TaqMan探针，d)标准阳性DNA模板，e)PCR荧光定量反应液，其特征是：引物序列分别为正义引物：5′-CCTGAATTCTCTTGCAGCCAGA-3′，反义引物：5′-CCTACCGAACCGACGCAGAT-3′，扩增子大小为100bp，荧光探针序列为：5′-FAM-TGAGAAGGTACTCCTCGTCGCTGGACCA-TAMRA-3′，探针的5′端标记荧光发射基团FAM，3′端标记荧光淬灭基团TAMRA，标准阳性DNA模板由已插入腺病毒3型pol蛋白100bp片段的pGEM-T载体转化大肠杆菌DH5α，增殖后提取质粒制备，并于紫外分光光度计测A260定量并10倍梯度稀释。