酵母中来自Tritirachium album的重组蛋白酶K的表达

摘要

本发明涉及在酵母中例如在巴斯德毕赤氏酵母中表达编码可溶性蛋白酶K的基因并接着分泌到培养基中的方法。本发明另外描述了异源表达和分泌的蛋白酶K的纯化方法。

主权项

1.制备重组蛋白酶K的方法，包括步骤：a)用包含编码蛋白酶K的酶原母体的DNA的载体转化宿主细胞，其中所述编码序列的DNA在读框中与编码信号肽的序列向上游融合并且处于该宿主细胞的合适的启动子的调控之下，b)蛋白酶K的酶原母体的表达，c)蛋白酶K的分泌和自动催化激活，其特征在于编码酶原母体的DNA是用于在酵母中表达的密码子优化核酸序列，信号肽是来自啤酒糖酵母的α-因子的信号肽或者前蛋白酶K的天然信号肽，启动子是甲醇可诱导的来自巴斯德毕赤氏酵母的醇氧化酶1的启动子(AOX-1启动子)，宿主细胞是酵母细胞，由表达宿主分泌可溶形式的酶原母体，并且在培养基中自动催化激活形成活性蛋白酶K。