主权项 |
1、一种黄芪均多糖的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一,取黄芪粗粉,用3倍量体积分数的乙醇回流脱脂1.5h,其中乙醇为体积分数为95%的乙醇;过滤,药渣中加入为药渣6~12倍量体积分数的水回流提取90min,过滤,重复提取2次,合并滤液;步骤二,取滤液,浓缩至滤液体积的1/5~1/10,得到浓缩液,在浓缩液中加入体积分数为95%的乙醇,搅拌,直至溶液中的乙醇的体积分数为50%~80%,沉淀,静置过夜,离心或过滤,收集沉淀物,洗涤,60℃真空干燥,即得黄芪粗多糖;步骤三,利用步骤二得到的黄芪粗多糖制备20g·L-1的黄芪粗多糖水溶液,按照黄芪粗多糖与胃蛋白酶的摩尔比为1∶1~1∶5的比例向黄芪粗多糖水溶液中加入胃蛋白酶,37℃下酶解3~7小时,煮沸10min,离心,得到上清液;步骤四,按上清液与Sevage试剂体积比为4∶1~6∶1的比例,在上清液中加入Sevage试剂,其中Sevage试剂具体为:氯仿与正丁醇按体积比为4∶1配制而成;振摇萃取,离心并收集上层水相溶液,重复操作3~6次;步骤五,在步骤四得到的水相溶液中加入二乙氨基乙基纤维素,使二乙氨基乙基在水相溶液中的重量百分比为0.5%~1.5%,煮沸10~20min,过滤,得到滤液,将滤液浓缩至步骤三中的黄芪粗多糖水溶液体积的1/10,浓缩液用截流分子量为3000的透析袋进行透析,透析3d,在透析后的溶液中加入体积分数为95%的乙醇,直至溶液中乙醇的体积分数为80%,沉淀,静置过夜,离心或过滤,收集沉淀物,洗涤,60℃真空干燥,即得精制黄芪多糖;步骤六,取精制黄芪多糖,超声水溶解,二乙氨基乙基弱阴性离子交换柱层析分离,去离子水洗脱,流速为0.8~1.2mL·min-1,苯酚硫酸法检测,合并490nm处有吸收的部分,浓缩,冷冻干燥,得到白色固体物;步骤七,将步骤六中得到的白色固体物加水溶解,经凝胶柱层析纯化分离,去离子水洗脱,流速为8~10mL·h-1,HPLC-ELSD监测,根据液相图谱合并保留时间最长的对称峰部分,浓缩,冷冻干燥,即得黄芪均多糖。 |