一种动物源细菌对β-内酰胺类药物耐药基因三重PCR检测技术

摘要

本发明涉及一种动物源细菌对β-内酰胺类药物耐药基因三重PCR检测技术，该方法包括扩增待测细菌耐药基因的三对PCR引物以及PCR模板制备试剂和细菌耐药基因多重PCR扩增试剂。较传统药敏试验，该多重PCR方法将检测时间从3-4天缩短至1天内完成。病原菌经常含有多种β-内酰胺酶基因，而该技术满足了同时检测多种基因的需求，提高了检测的准确性和特异性。该技术可用于检测临床分离菌中三种β-内酰胺类药物耐药基因。

主权项

1、一种动物源细菌对β-内酰胺类药物耐药基因三重PCR检测技术，含有PCR模板制备试剂和细菌耐药基因三重PCR扩增试剂，其特征在于：所述PCR模板制备试剂是由洗涤液、样品处理液组成，所述细菌耐药基因三重PCR扩增试剂包括10倍PCR缓冲液组分为50mMKCl、pH8.3的10mM Tris.HCl和0.01％明胶，浓度均为2.5mmol/L的dGTP、dCTP、dATP和dTTP，浓度为25mM/L MgCl2，三大类耐药基因即CTX-M基因、SHV基因和TEM基因的特异性上下游引物浓度均为25mmol/L，浓度为5U/ULTaq DNA聚合酶和超纯水。所述动物源细菌β-内酰胺类药物耐药基因三重PCR扩增试剂各组分的终浓度如下：1倍PCR缓冲液，dGTP、dCTP、dATP和dTTP的终浓度均为0.25mmol/L，MgCl2的终浓度为2.5mM/L，β-内酰胺类药物耐药基因CTX-M、SHV、TEM的终浓度分别为0.8mmol/L、0.5mmol/L、0.25mmol/L，Taq DNA聚合酶终浓度为0.8U/100UL。