LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法

摘要

一种LTB-羧甲基壳聚糖鼻腔免疫微球的制备方法，是以碳化二亚胺类化合物为交联剂，以LTB和羧甲基壳聚糖为主要原料合成LTB-羧甲基壳聚糖交联物；将流感裂解疫苗和表面活性剂溶解于LTB-羧甲基壳聚糖交联物溶液中，与油相物质混合，经搅拌形成稳定的乳液后加入固化剂水溶液，搅拌沉淀后分离洗涤，真空干燥后即得到LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球。该微球生物相容性和生物黏附性好，经鼻腔免疫大大提高了LTB的佐剂活性，增强了流感疫苗的机体局部和全身的体液免疫及细胞免疫效果；同时克服了传统注射流感疫苗造成的患者顺应性差、注射器和针头导致感染、减活疫苗在储存和运输过程中易失活等缺点，且制备方法简单易行，条件温和，生产成本较低。

主权项

1、一种LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗鼻腔免疫微球的制备方法，其特征是：1. 1、取羧甲基壳聚糖溶液和氯化钠溶液混合得混合水溶液，碳化二亚胺类化合物溶解于二甲基亚砜溶剂中，向混合水溶液中加入含有碳化二亚胺类化合物的二甲基亚砜溶液，搅拌30～60分钟，4～8℃反应1～8小时，最终得混悬液，向混悬液中加入LTB的PBS缓冲液，pH6.5～.0，4～8℃反应1～8小时，加入甘氨酸反应1～4小时，反应液过硅胶柱，洗脱液：乙酸-水-丁醇，摩尔比为1∶1～3∶4～8，收集产物；用流动去离子水透析24～48小时，收集透析液的LTB-羧甲基壳聚糖交联物，LTB、甘氨酸、碳化二亚胺类化合物、氯化钠、羧甲基壳聚糖质量比为1∶1～10∶1～10∶1～10∶50～100；1. 2、取LTB-羧甲基壳聚糖交联物溶解于PBS缓冲液中，pH6.5～8.0，将流感裂解疫苗和表面活性剂溶解在LTB-羧甲基壳聚糖交联物PBS缓冲液中作为水相，流感裂解疫苗、表面活性剂与交联物的质量比为1∶10～50∶100～500；1. 3、将第二步的水相加入到油相中，搅拌形成稳定的乳液；其中水相与油相的体积比为1∶5～20，搅拌45～90分钟，转速为500～4000转/分钟；1. 4、向第三步制得的乳液中加入浓度为1～30％(w/v)的固化剂，乳液与固化剂溶液的体积比1∶1～2，继续搅拌1～3小时后停止；1. 5、离心分离第四步制得的分散体系，分出下层的微球，洗涤，真空干燥得到LTB-羧甲基壳聚糖流感疫苗微球。