HA标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用

摘要

HA标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用，属于生物医药技术领域。本发明用碳化二亚胺法合成HA-tag完全抗原，免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术进行细胞融合，通过有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸-硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。结果显示：HA-tag完全抗原偶联成功，经细胞融合、筛选及克隆化，成功获得1株分泌HA标签mAb的杂交瘤细胞株。制备腹水测得腹水效价高于1∶10⁶，且此株mAb与其他融合蛋白标签无交叉反应，单抗用于融合蛋白的Western-blotting和免疫组化检测，建立了可用于HA融合蛋白纯化和检测的方法。

主权项

1、HA标签单克隆抗体的制备方法，其特征是用碳二亚胺法合成HA-tag完全抗原，免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术进行细胞融合，通过有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株，得到HA标签单克隆抗体，步骤为：(1)免疫抗原的合成：称取4.4mg HA-tag和5mg OVA溶于1mLpH7.0、0.05mol/L的PB中，充分溶解后，将200μL含有2.2mg碳二亚胺的PB溶液逐滴加入，边滴入边混匀，摇床100r/min反应4h，4℃静置过夜，用0.01mol/L、pH7.0 PBS透析72h，得到HA-tag-OVA免疫抗原，存储于-20℃备用；(2)包被抗原的合成；合成方法同免疫抗原的合成，载体蛋白为BSA，得到HA-tag-BSA包被抗原，存储于-20℃备用；(3)杂交瘤细胞株的建立按常规方法免疫BALB/c小鼠，20～30μg/只，末次免疫后免疫小鼠血清效价达到1∶10000以上，进行细胞融合，并以间接ELISA法筛选分泌抗HA-tag的阳性克隆，得到HA标签单克隆抗体。