一种使用Sepharose 4FF凝胶对细菌多糖进行纯化的方法

摘要

本发明一种使用Sepharose 4FF凝胶对细菌多糖进行纯化的方法，属于生物技术领域，其步骤为在对细菌多糖进行预处理后，使用Sepharose 4FF凝胶对细菌多糖进行纯化，收集Kd 0.5之前的组分，可获得纯度高，内毒素含量低的细菌多糖。本发明获得的纯度高、内毒素含量低的细菌多糖适合于制备细菌多糖疫苗及细菌多糖结合疫苗。

主权项

1、一种使用Sepharose 4FF凝胶对细菌多糖进行纯化的方法，具体步骤是：(1)采用生物反应器对细菌进行发酵培养；(2)于对数生长后期杀菌，离心收集上清液；(3)制备粗制多糖；(4)对粗制多糖进行预处理，用截留分子量10～100kD的超滤膜超滤浓缩至多糖浓度为2～50mg/ml；(5)以2～15％柱体积上样于Sepharose 4FF凝胶柱，以含0.02～1.0mol/L氯化钠或氯化钙的洗脱液洗脱，收集Kd0.5之前的组分；(6)洗脱液加入乙醇至终浓度50-90％沉淀多糖，离心收集多糖沉淀；(7)沉淀分别用无水乙醇、丙酮各洗涤2次；(8)经冷冻干燥，获得高纯度的精制多糖。