发明名称 |
缺氧诱导真核基因表达载体及其用途 |
摘要 |
本发明公开了一种缺氧诱导真核基因表达载体及其用途。所述发明对pcDNA3.1进行了改造,将其增强子用缺氧诱导的增强子替代,构建了缺氧诱导基因表达载体;为了检测缺氧诱导基因表达载体的功能,将hVEGF<sub>165</sub>的cDNA插入到载体中,构建了含hVEGF<sub>165</sub>的缺氧诱导真核基因表达载体p6HRE-hVEGF<sub>165</sub>,并将该载体转入BHK细胞中,用免疫组化的方法检测hVEGF<sub>165</sub>,证明将该载体可表达外源基因;表达hVEGF的BHK细胞在缺氧环境下培养,用ELISA的方法检测培养上清液中hVEGF的含量,结果证明缺氧诱导后hVEGF的表达量增加;将p6HRE-hVEGF<sub>165</sub>用于家兔肢体缺血性疾病的基因治疗,可有效地促进患肢新生血管和侧支循环的形成,使患肢胫动脉压恢复。本发明可用于缺血性疾病的基因治疗和肿瘤的基因治疗,它不仅为探索缺血性疾病的基因治疗提供了基础,还为其他与缺氧有关疾病及肿瘤的基因治疗开辟了新的途径。 |
申请公布号 |
CN101532027A |
申请公布日期 |
2009.09.16 |
申请号 |
CN200710195767.4 |
申请日期 |
2007.12.14 |
申请人 |
首都医科大学 |
发明人 |
郑少鹏;殷爱红;武文琦 |
分类号 |
C12N15/79(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P9/10(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/79(2006.01)I |
代理机构 |
北京天昊联合知识产权代理有限公司 |
代理人 |
罗会英;刘榜美 |
主权项 |
1、一种缺氧诱导真核基因表达载体,其特征在于:所述发明对pcDNA3.1进行了改造,将其增强子用缺氧诱导的增强子替代,构建了缺氧诱导基因表达载体;为了检测缺氧诱导基因表达载体的功能,将hVEGF165的cDNA插入到载体中,构建了含hVEGF165的缺氧诱导真核基因表达载体p6HRE-hVEGF165,并将该载体转入BHK细胞中,用免疫组化的方法检测hVEGF165,证明将该载体可表达外源基因;表达VEGF的BHK细胞在缺氧环境下培养,用ELISA的方法检测培养上清液中VEGF的含量,结果证明缺氧诱导后VEGF的表达量增加。 |
地址 |
100069北京市丰台区右安门外西头条10号 |