基于碱基修饰保护往复延伸的DNA测序方法

摘要

一种基于碱基修饰保护往复延伸的DNA测序方法，DNA序列的确定是通过基于碱基修饰保护的“标记延伸-切割-保护延伸”测序步骤来实现的。该方法能实现原位清除延伸标记物，同时保护引物延伸末端完整、能够逐步合成鉴定未知碱基；逐一的单体延伸测序，延伸一种标记单体，提取信息，然后清除这种单体，加上修饰保护单体，再衍生下一种标记单体，错误延伸的累积效应不严重，序列的判读明了准确，不存在测序长度的限制。

主权项

1.一种基于碱基修饰保护往复延伸的DNA测序方法，其特征在于DNA序列的确定是通过基于碱基修饰保护的“标记延伸-切割-保护延伸”测序步骤来实现的，具体测序步骤为：a.向待测定DNA模板3′端引入一段20-50碱基长度的公用片段作为测序引物杂交序列，将与公用片段互补的3′端碱基修饰保护的测序引物与固定在固相载体上的待测定DNA模板杂交结合；b.标记延伸：向步骤a)所得杂交后的测序DNA模板中，顺序加入或同时加入标记核苷酸单体，在测序引物上进行延伸反应，并根据延伸上的标记核苷酸单体得出待测定DNA模板在该次延伸中的碱基信息；c.切割：将步骤b)中延伸上的标记核苷酸单体通过切割方法进行清除；d.保护延伸：在经步骤c)处理后的测序引物序列上延伸与步骤c)中被切除碱基相同的修饰保护核苷酸单体；e.循环上述步骤b)、c)和d)所进行的“标记延伸-切割-保护延伸”过程，由此确定待测定DNA模板的序列。