抗β-catenin单克隆抗体制备及在结肠癌病理检测中的应用

摘要

抗β-catenin单克隆抗体制备及在结肠癌病理检测中的应用，属于生物医药技术领域。本发明应用重组小鼠β-catenin蛋白，免疫Balb/c小鼠，应用杂交瘤技术，通过ELISA双筛得到1株抗β-catenin单抗1D3，其亚型为IgG2a。用免疫印迹法(Western blot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及结肠癌细胞系SW48和HCT116中β-catenin蛋白的表达。用免疫组化SP法检测β-catenin在正常结肠组织和结肠癌组织中的不同表达。本发明制备了高效价、特异性的抗β-catenin单克隆抗体。用该抗体检测证实，正常结肠组织β-catenin表达在细胞膜中，而结肠癌组织β-catenin则在细胞浆中表达。提示结肠癌发生后β-catenin由细胞膜易位入细胞浆中表达，这可作为结肠癌的诊断的参考指标。

主权项

1、一种抗β-catenin单克隆抗体的制备方法，其特征是应用重组小鼠β—catenin蛋白，免疫Balb/c小鼠，应用杂交瘤技术，通过ELISA双筛得到1株抗β-catenin单抗1D3，其亚型为IgG2a；步骤为：将免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，HAT培养液选择培养10天，6块96孔板中500孔有杂交瘤细胞生长，融合率为90％；融合后第12天，进行第1次ELISA双筛选，先将吸出的上清分别与融合蛋白β-catenin和P21包被的抗原板行EL1SA检测，选择β-catenin为阳性而P21为阴性的克隆进行第一次亚克隆，此后重复进行ELISA筛选及亚克隆3-4次，最后获得1株能稳定分泌抗β-catenin McAb的杂交瘤细胞株，命名1D3，亚类鉴定为IgG2a。