发明名称 |
一种使用同一份脐带血的血清来收获干细胞的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种使用同一份脐带血的血清来收获干细胞的方法,属于生物技术与组织工程领域。用同一份脐带血的血清代替胎牛血清、不添加细胞因子及无基质细胞支持,采用微载体与生物反应器相结合的策略,实现脐带血来源造血干细胞与间充质干细胞的共培养。本发明能够支持UCB-HSCs、UCB-MSCs在三维条件下良好扩增,完全替代胎牛血清的作用,还能避免异体间的免疫排斥反应;cytodex-3微载体能够为贴壁生长特性的UCB-MSCs提供黏附表面,使UCB-MSCs在在三维动态环境中实现贴壁悬浮培养成为可能;采用自然沉降的方法,将悬浮的UCB-HSCs和黏附在微载体上的UCB-MSCs两种干细胞分离并收获。 |
申请公布号 |
CN101525596A |
申请公布日期 |
2009.09.09 |
申请号 |
CN200910301568.6 |
申请日期 |
2009.04.15 |
申请人 |
大连理工大学 |
发明人 |
刘天庆;殷轶群;关水;鲍春雨;葛丹;李香琴;崔占峰;马学虎 |
分类号 |
C12N5/08(2006.01)I |
主分类号 |
C12N5/08(2006.01)I |
代理机构 |
大连理工大学专利中心 |
代理人 |
梅洪玉 |
主权项 |
1.一种使用同一份脐带血的血清来收获干细胞的方法,其特征在于以下步骤:(1)分离人脐带血单核细胞:脐带血来自健康产妇足月分娩或足月剖腹产婴儿,每次脐带血采集量平均为50~100mL;脐带血采集后,按体积比1∶1与PBS缓冲盐溶液混合均匀,用密度为1.077g.mL-1的Ficoll细胞分离液以2500rpm、25分钟密度梯度离心后获得单核细胞,Ficoll细胞分离液与脐带血的体积比为1∶1~1∶2;分离后的细胞用IMDM基础培养基1000rpm、5分钟离心洗涤两次,调整细胞密度备用;(2)获得同一份脐带血血清:脐带血采集后,按体积比1∶1与PBS缓冲盐溶液混合均匀,用密度为1.077g.mL-1的Ficoll细胞分离液以2500rpm、25分钟密度梯度离心后,收获单核细胞;然后用滴管吸取第一层血清液,置入无菌离心管中备用;(3)cytodex-3微载体的预处理:将干燥的cytodex-3微载体置于硅化处理的玻璃瓶中,并用不含Ca2+、Mg2+离子的PBS缓冲盐溶液在室温下浸泡4小时以上,偶尔搅拌;用新的不含Ca2+、Mg2+离子的PBS缓冲盐溶液冲洗两次后,高压灭菌备用;(4)共培养UCB-HSCs与UCB-MSCs:将分离得到的UCB-MNCs以2×106cells.mL-1的密度接种到提前铺满cytodex-3微载体的24孔板中,添加20%的脐带血血清;采用自然沉降的方法将悬浮的UCB-HSCs和粘附在GCSC微载体上的UCB-MSCs分离并收获。 |
地址 |
116085辽宁省大连市甘井子区凌工路2号 |