发明名称 |
一种双色竞争性荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒 |
摘要 |
本发明涉及一种双色竞争性荧光定量共扩增聚合酶链反应试剂盒,首先根据21号染色体特异序列DSCR区段序列和2号染色体上的USC2序列分别合成其特异共用引物和特异性双色Taqman探针,然后在PCR扩增缓冲反应体系中在多色荧光定量热循环仪上进行高温、低温、中温的反复热循环,实现两个DNA片段的竞争性扩增。在PCR扩增的同时检测扩增过程中由于降解Taqman探针获得的两个DNA片段扩增的荧光信号的强弱变化情况,获得扩增动力学曲线图,进而得出各个标本的上述两个DNA片段扩增的Ct值,从而计算它们的拷贝数比值,再根据两个基因拷贝数的比值进一步判断21号染色体的倍性。 |
申请公布号 |
CN101525661A |
申请公布日期 |
2009.09.09 |
申请号 |
CN200910020242.6 |
申请日期 |
2009.03.30 |
申请人 |
山东亚大药业有限公司 |
发明人 |
夏庆杰;杨林 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;G01N21/64(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
济南诚智商标专利事务所有限公司 |
代理人 |
王汝银 |
主权项 |
1、一种双色竞争性荧光定量PCR试剂盒,含有扩增21号染色体特异单拷贝区段DSCR和2号染色体特异单拷贝区段USC2的竞争性荧光定量PCR试剂,其特征在于:首先根据21号染色体特异序列DSCR区段序列和2号染色体上的与之有一定的同源性的特异单拷贝USC2序列分别合成其共用PCR引物和特异性双色Taqman荧光探针,然后将0.2-0.4umol/LDSCR和USC2特异的共用引物、DSCR特异的和USC2特异的双色荧光Taqman探针加入同一个PCR扩增缓冲反应体系,在多色实时荧光定量PCR仪上进行96℃预变性2min,然后94℃变性10sec,50-55℃复性30sec,60℃延伸40sec,共45个循环,并在延伸时检测荧光强度,使引物分别同时竞争性地引导DSCR和USC2两种特异单拷贝DNA区段的新链合成,实现两个基因片段的竞争性扩增和其拷贝数的定量检测,所述的DSCR和USC2特异的共用引物为:上游引物5’-AAA GTT TCT TCT GGA TCT ACA G-3’;下游引物:5’-TCC TCT GTGCTC TGA GCT AAG-3’;探针的序列和荧光标记:DSCR TaqMan探针:5’-[FAM]ACA TTTTGG ATG CAC TGG GA[TAMRA]-3’;USC2特异TaqMan探针:5’-[HEX]CAA AAC TCACAG AGG GAC TC[TAMRA]-3’。 |
地址 |
252000山东省聊城市花园南路151号 |