黄伞菌丝体富硒培育及黄伞硒多糖的提取工艺

摘要

本发明公开了一种黄伞菌丝体富硒培育及黄伞硒多糖的提取工艺，包括黄伞菌种的活化、液体培养种子的制备、种子的扩大培养和黄伞硒多糖的提取等方法步骤，本发明通过黄伞菌丝体的富硒培育，提取黄伞硒多糖，具有工艺合理，硒多糖的得率高，硒多糖中的硒浓度含量高的特点。

主权项

1、一种黄伞菌丝体富硒培育及黄伞硒多糖提取工艺，其特征在于包括以下方法步骤：(1)黄伞菌种的活化制备PDA培养基，装入规格为180×80的试管内，封口、灭菌、摆斜面，培养基冷却后，在无菌条件下，将冷藏保存的黄伞菌母种转接活化，在25℃下进行菌种的扩大培养；(2)液体培养种子的制备按马铃薯100g、麦麸50g、葡萄糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g和蒸馏水1000ml的配比制备液体培养基，分装于500ml的三角瓶封口后，进行高压灭菌，在0.15Mpr/cm2、125℃条件下灭菌20min；取出待液体培养基温度降至30℃以下时，按无菌操作规程选取经步骤(1)活化培养后的菌种，接入液体培养基中；每支试管菌种扩接6-8瓶三角烧瓶；将接种后的三角烧瓶置于摇床中进行避光培养，温度为22-26℃，转速为120-160r/min，培养时间为90-120h，待菌丝球呈米粒状并布满培养液时，停止培养，用作液体培养的种子；(3)种子的扩大培养在由(2)组成的液体培养基中添加配制成一定浓度的亚硒酸钠母液，调整培养基中硒离子浓度为20-50ppm；将上述培养液装入50-200L液体发酵罐中，装入培养基的体积量为发酵罐容量的70％；经灭菌冷却待培养液温度降到20-30℃时，按无菌操作规程将步骤(2)制备的液体培养种子接种到发酵罐中，接种量为培养液体积的3％-10％；控制培养温度22-26℃，罐压0.01-0.03MPa/cm2，通气量0.02-0.04m3/min，培养时间为80-120h，待菌丝球布满培养基时停止培养；(4)黄伞硒多糖的提取将扩大培养的获得的菌丝球用蒸馏水清洗3-5次后，加入10倍于菌丝球湿重的蒸馏水进行热水浸提，提取温度为85-100℃，提取时间2-4h；将压滤后的滤液导入浓缩罐中，在0.085-0.095MPa的真空度下，浓缩至原体积的1/3-1/5；浓缩液取出后按1∶2-1∶4比例加入60-95％乙醇，静置一夜，取其沉淀部分，于5000r/min下离心10h，60℃烘干，即得粗黄伞硒多糖。