人α防御素5活性肽的基因工程制备方法

摘要

本发明涉及一种人α防御素5活性肽的基因工程制备方法。本发明公开了含人α-防御素5活性肽基因的表达载体构建及其转化酵母克隆株的筛选、高密度发酵的方法和从发酵上清中分离纯化活性多肽的方法。本发明还公开了由上述方法获得的人α防御素5活性肽在多肽药物制备中的应用。本发明适用于工业化生产规模中经过简单的操作实现高效发酵表达和低成本、高效率地纯化制备具有高效杀灭多种病原细菌和抗HPV等病毒的人α防御素5活性肽。

主权项

1.一种人α防御素5活性肽的基因工程制备方法，其特征在于包括步骤：1)目的基因的获取：克隆人α防御素5的cDNA编码序列，序列如SEQ IDNO：1所示；2)将步骤1)所得目的基因插入穿梭质粒中，构建重组表达质粒；3)将步骤2)所得重组表达质粒转化入酵母细胞中，筛选出基因组中整合有多拷贝目的基因的酵母克隆株；4)高密度培养步骤3)所筛选的酵母克隆株，并用甲醇诱导目的基因的高效表达；5)从步骤4)所获得的发酵上清中分离纯化人α防御素5活性肽。