半夏多倍体植株的制备方法

摘要

本发明公开了一种半夏多倍体植株的制备方法，通过半夏叶片诱导质地疏松愈伤组织，再将其进行悬浮培养，分离半夏单细胞，然后将分离得到的单细胞用秋水仙素进行处理，洗去秋水仙素后在单细胞培养基中进行培养，将形成的细胞团块转接到愈伤组织诱导培养基中培养，愈伤组织形成后转移到丛生芽培养基中培养，植株叶子完全展开后转移到生根培养基中进行生根培养，然后取根尖进行染色体观察以确定植株倍性，从而得到半夏多倍体植株。采用该方法获得的半夏多倍体植株具有显著的多倍体特征，且筛选过程相对简便。

主权项

1、一种半夏多倍体植株的制备方法，其特征在于：通过悬浮培养分离制备单细胞作为多倍体诱导的材料，包括如下步骤：1)、将幼嫩的半夏叶片经表面消毒后切成0.4～0.6cm2的小块接种到愈伤组织诱导培养基中进行光照培养，获得质地坚硬愈伤组织；2)、将上述质地坚硬愈伤组织转接到愈伤组织继代培养基中进行光照培养，获得质地疏松愈伤组织；3)、将上述质地疏松愈伤组织夹碎后接种到液体培养基中，然后置于光照条件下进行悬浮振荡培养，获得细胞悬浮培养物；将所述细胞悬浮培养物用细胞筛过滤以除去大愈伤组织团块，获得细胞滤液；4)、将细胞滤液过滤、离心后，弃上清，收集细胞；然后用单细胞液体培养基悬浮上述细胞；5)、以步骤4)所得的悬浮单细胞为材料，用秋水仙素溶液进行多倍体诱导；6)、将诱导处理后的细胞溶液采用离心和洗涤的方法去除秋水仙素；7)、将上述除去秋水仙素的单细胞用单细胞液体培养基进行光照条件下的液体浅层培养；8)、当细胞团长到0.5～2mm时，将细胞团转接到愈伤组织诱导培养基中进行光照培养；9)、待愈伤组织形成后转移到丛生芽培养基中进行光照培养；10)、当所得的再生植株叶子完全展开时，转接到生根培养基中进行光照条件下的生根培养，获得可栽培的半夏再生植株；11)、对半夏再生植株进行染色体倍性鉴定，从上述半夏再生植株中筛选出半夏多倍体植株。