利用氧化锌量子点进行免疫测定的方法

摘要

本方法中利用在量子点上层层组装辣根过氧化物酶，然后在外层组装上抗体。同时在金电极上生长氧化锌纳米棒，在氧化锌纳米棒上也组装抗体。然后通过抗体和抗原的特异结合使待测抗原和量子点上的抗体与氧化锌纳米棒上的抗体结合，用极少量的抗原把组装有大量辣根过氧化物酶的量子点连接到纳米氧化锌金电极上，然后检测辣根过氧化物酶对过氧化氢催化的电化学响应，建立起抗原浓度和辣根过氧化物酶对过氧化氢催化的电化学信号之间的关系。通过这种检测方法，使极低浓度的抗原即能产生明显的电化学催化信号，起到了信号放大的作用。这在医学领域的疾病早期检测方面有着重要的意义。

主权项

1.一种利用氧化锌量子点进行免疫测定的方法，其特征在于测定步骤为：第一步：将直径0.3～0.7毫米的电极金属丝一端烧熔成一个直径0.8～1.2毫米的小球，再在小球表面蒸镀一层100～300纳米厚的锌，放在管式炉里在250～350℃氧化30～60分钟，取出后用1.5～2.5M KOH溶液煮沸1～3小时，取出后用去离子水清洗，再放置于含H2O2体积百分数为10％～30％的H2SO4中30～60分钟后取出，再用去离子水清洗，室温干燥；第二步：将锌粉末和去离子水混合超声10～20分钟，静置30～60分钟，倾去水，把锌粉末和水按质量比0.5～1∶100混合转移至高压釜中，静置至无悬浮颗粒，将第一步处理过的电极金属丝浸入水中，不触及沉在高压釜底部的锌粉，密封，使其能承受最大压力不小于1.5×105Pa，加热至80～95℃，保持6～15小时，自然冷却至室温，取出，用去离子水清洗，得到生长有纳米氧化锌的电极；第三步：利用氧化锌PI＝9.4的高等电点把第二步制得的电极在中性条件下浸入含有0.2～0.8M NaCl的1～2mg/mL聚苯乙烯磺酸钠溶液中1～4小时，取出用去离子水清洗，再在30～37℃时浸入0.01～0.02mg/mL的抗体溶液中1～3小时，去离子水清洗后即得组装抗体的氧化锌纳米棒电极；第四步：配制0.01～0.1M醋酸锌的乙醇溶液，搅拌加入聚乙烯吡咯烷酮，加入量为0.1～1克聚乙烯吡咯烷酮/10mL溶液，得到量子点前驱体溶液，40～60℃时搅拌滴加与量子点前驱体溶液等体积的0.05～0.5M氢氧化钠乙醇溶液，添加完毕后恒温搅拌1～2小时，离心分离，用乙醇和去离子水交替清洗得氧化锌量子点；第五步：按0.2～2mg/mL的比例将第四步制得的氧化锌量子点分散到含0.2～0.8M NaCl的1～2mg/mL聚苯乙烯磺酸钠溶液中，超声分散30～60分钟，离心分离，用水清洗后加1～2mg/mL辣根过氧化物酶溶液200微升，摇振2～6小时，离心分离，用水清洗；第六步：重复第五步3～5次，得多层修饰量子点，向量子点中加入1～2mg/mL含0.2～0.8M NaCl的的聚苯乙烯磺酸钠溶液1毫升，摇振1～2小时，用水清洗后加0.01～0.02mg/mL的抗体溶液200微升，30～37℃摇振1～3小时，离心分离，用水清洗后得修饰有抗体的多层组装辣根过氧化物酶的氧化锌量子点；第七步：将第六步制得的量子点分散到1毫升0.1纳克/毫升～1微克/毫升的抗原溶液中，并将第三步制得的电极浸入此抗原溶液中，30～37℃温育20～30分钟，取出用水清洗得；第八步：将第七步制得的电极作为工作电极，铂丝电极作为对电极，银/氯化银电极作为参比电极，组成三电极体系，用pH＝7的0.01～0.1M磷酸氢钠、磷酸二氢钠缓冲溶液作为电解液构建生物/化学传感器，连接电化学工作站，检测得到辣根过氧化物酶对双氧水的催化电化学信号。