利用奇异变形杆菌制备生物絮凝剂的方法

摘要

利用奇异变形杆菌制备生物絮凝剂的方法，涉及一种生物絮凝剂的制备方法，其工艺如下：A、将奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)转种到斜面培养基上，并保藏在冰箱2～6℃中；B、将保藏的菌种接种到种子培养基中，然后在摇床培养箱中25～30℃培养制备种子液；C、将所得种子液按1～2‰的比例接种到廉价的生产培养基中，然后放入摇床内，25～30℃，120～140r/min，1～2天得到菌种的生产培养基发酵液，将该发酵液通过4000～6000r/min离心机离心分离20～40min，除去沉淀，上清液即为液态生物絮凝剂，测定絮凝率；D、液态生物絮凝剂提取纯化得生物絮凝剂纯品。本发明培养成本低、生产周期短、经测定絮凝效率高达92.88～93.13％、使用后无二次污染、能适应大规模生产及工业化应用，具有很好的推广应用价值。

主权项

1、利用奇异变形杆菌制备生物絮凝剂的方法，A、菌种的斜面保藏及转种先配置保藏菌种用的斜面培养基，其组分和含量g/L为：牛肉膏3～5，琼脂15-20，蛋白胨8～12，NaCl 4～6；将pH调整为7.0～7.2，并在115～121℃下灭菌20～30min；然后在无菌操作环境中，将奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)接到斜面培养基上，在恒温培养箱中25～30℃下培养1～2天后，在冰箱内2～6℃下保藏；以后每过1个月将菌种转移至新鲜配置的斜面培养基上；其特征在于：B、种子液的制备从冰箱中取出A步得到的新鲜配置的斜面培养基和转移在培养基上的菌种，移到恒温培养箱中25～30℃下培养1～2天后，再回冰箱内2～6℃下保藏，1～2天内取出，在无菌操作环境中，将斜面上的菌种转移至种子培养基中，种子培养基的组分和含量g/L为：葡萄糖18～22，尿素0.4～0.6，酵母膏0.4～0.6，K2HPO4 4～6，KH2PO4 1～3，NaCl 0.05～0.2，(NH4)2SO4 0.1～0.3，MgSO4·7H2O0.1～0.3，pH6.8～7.2；115～121℃下灭菌20～30min；将接种了菌种后的种子培养基放入摇床培养箱中培养，温度为25～30℃，摇床转速为150～170r/min，时间为2～3天，然后将其保藏在冰箱内，2～6℃下1～2天，备用；C、液态生物絮凝剂的制备及絮凝率的测定在无菌操作环境中，将种子液按1～2‰的比例接种至生产培养基中；生产培养基的组分和含量g/L为：葡萄糖8～12，蛋白胨0.8～1.2，MgSO4 0.2～0.3，K2HPO4 4～6，KH2PO4 1～3，其pH为6.8～7.2，并在115～121℃下灭菌20～40min；然后将接种后的生产培养基放入摇床培养箱中发酵，温度为25～30℃，摇床转速为120～140r/min，时间为1～2天得到菌种的生产培养基发酵液，该发酵液通过4000～6000r/min离心机离心分离20～40min，除去沉淀，上清液即为液态生物絮凝剂，测定絮凝率后将其保藏在冰箱内2～6℃下，备用；D、生物絮凝剂的提取纯化向液态生物絮凝剂中加入2～3倍体积的无水乙醇，在冰箱内2～6℃静置过夜，再用1000～4000r/min离心机分离20～40min；倾去上清液，往沉淀中加入2～3倍体积的无水乙醇，重复上面步骤1～3次；将沉淀物重新溶解于去离子水中，加入浓度为2％的十六烷基三甲基溴化铵，直至无沉淀产生，再经离心分离得沉淀物备用；将沉淀物重新溶解于2～3％的NaCl溶液中，加入2～3倍体积的无水乙醇，混合均匀，在冰箱内2～6℃静置过夜，离心得沉淀物，把沉淀物真空冷冻干燥得纯化的生物絮凝剂。