乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选方法

摘要

本发明涉及一种乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选方法，该方法系电泳介导的微分析技术，在毛细管中用酶催化水解底物的一步反应，然后在紫外230nm处直接测定产物峰面积实现酶活的测定和酶抑制剂的筛选方法；该方法不仅具有快速简便、重复性好、试剂消耗少、准确性高，而且，适用于乙酰胆碱酯酶酶抑制剂的筛选和分析，尤其适用于如中药粗提液等混合化合物样品中乙酰胆碱酯酶酶抑制剂的筛选和临床快速诊断与乙酰胆碱酯酶相关的疾病。

主权项

1，一种乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选方法，其特征是采用电泳介导的微分析技术，在紫外230nm处直接测定产物峰面积实现酶活的测定和酶抑制剂的筛选方法；所述的酶为乙酰胆碱酯酶或丁基胆碱酯酶；所述的底物为硫代乙酰胆碱、硫代丙酰胆碱或硫代丁基胆碱；所述的电泳介导微分析技术为：1)将酶溶液和底物溶液分别以1-100纳升体积依次导入经过缓冲液处理过的毛细管，所述的缓冲液为pH为2-12的用硼酸盐、磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷或N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸，和磷酸、硼酸或盐酸的缓冲液，所述的酶的浓度范围为0-5mg/mL，底物的浓度范围为0-200mM，所述的底物溶液含或不含待筛选化合物、并含有浓度为0-100mM的无机镁盐，通常为硫酸镁或氯化镁；所述的毛细管柱总长是20-100cm，柱内径为25-100μm；2)在1千伏至30千伏下使两者混合1-300秒；3)断开电压，使酶和底物反应0-1小时；4)再加上1千伏至30千伏电压进行电泳分离；酶活用230nm处产物的峰面积表示。