生脉注射剂的检测方法

摘要

本发明提供了一种生脉注射剂的质量控制方法，该方法包括指纹图谱测试、鉴别和含量测定等项目；制定了以红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱和以五味子成分特征为主的指纹图谱来全面控制注射剂的质量，但生脉制剂的指纹图谱不是将红参或人参、麦冬和五味子药材或制剂的指纹图谱简单叠加就能得到的，只有采用本发明的条件，才能得到理想的指纹图谱。本发明质量控制方法对以红参或人参、麦冬和五味子制成的中药注射剂产品的质量控制更为有效，方法精密度、稳定性均较高。

主权项

1.一种生脉注射剂的检测方法，包括指纹图谱测试、鉴别测试方法以及含量测试方法，其特征在于：A、采用液相色谱法测试红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱：(1)供试品溶液的制备：取待测生脉注射制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)参照物溶液的制备：取适量红参或人参和麦冬药材中的主要活性成分对照品，包括对照品人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rf中的一种，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为参照物溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钠水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氢钾水溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸氢二钠水溶液或水或0.1％～5％冰醋酸溶液或0.1％～5％甲酸溶液或0.02％～5％磷酸溶液；B为10％～100％乙腈溶液或10％～无水甲醇溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～60℃范围内；(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以红参或人参和麦冬成分特征为主的标准指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～50个；(5)以(1)～(3)所述方法作为待测注射剂中红参或人参和麦冬成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(6)将待测注射剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求：I.计算待测注射剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～1.00；II.待测注射剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；III.待测注射剂指纹图谱中有30％～80％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中对应的各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于土50％；B、所述注射剂的鉴别方法包括以下内容：a、注射剂中五味子的薄层色谱鉴别方法：取待测生脉注射制剂适量，加三氯甲烷或乙醚或醋酸乙酯或正己烷或10％～无水乙醇或10％～无水甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷或醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取五味子对照药材、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲、五味子酯乙中的一种或几种制备对照溶液；五味子对照药材溶液的制备：取五味子对照药材适量，加三氯甲烷或乙醚或醋酸乙酯或正己烷或10％～无水乙醇或10％～无水甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷或醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲、五味子酯乙中一种或几种对照品；分别加三氯甲烷或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以30～60℃的石油醚或60～90℃的石油醚-甲酸乙酯或醋酸乙酯-甲酸或乙酸2～40∶0.2～15∶0.1～5的上层溶液或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯1～30∶0.2～10或正己烷-苯或甲苯-甲酸乙酯或醋酸乙酯-甲酸或乙酸0.2～5∶0.5～10∶1～15∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm检视或喷以2％～20％变色酸-浓硫酸溶液或2％～20％磷钼酸乙醇溶液或茴香醛硫酸溶液，在80℃～160℃烘至斑点显色清晰或碘熏显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱或者对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；b、注射剂中麦冬的薄层色谱鉴别方法：取待测生脉注射制剂适量，加三氯甲烷-甲醇混合溶液或正丁醇或三氯甲烷或醋酸乙酯或二氯甲烷提取，作为供试品溶液；另取麦冬对照药材，加三氯甲烷-甲醇混合溶液或醋酸乙酯或正丁醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取，滤过，蒸干，残渣加三氯甲烷或二氯甲烷溶解，作为对照药材溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以苯或甲苯或三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或水8～300∶0.5～100∶0.01～30或醋酸乙酯或甲酸乙酯-吡啶-水0.2～10∶0.1～5∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm下检视或喷以1％～50％硫酸或香草醛试剂或1％～25％香荚兰醛试剂或茴香醛试剂，在80℃～160℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点；c、注射剂中人参或红参的薄层色谱鉴别方法：取待测生脉注射制剂适量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，滤过，滤液作为供试品溶液；另取红参或人参对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf中的一种或几种，制备对照溶液；红参或人参对照药材溶液的制备：取红参或人参对照药材适量，加三氯甲烷或二氯甲烷回流提取，弃去三氯甲烷或二氯甲烷液，残渣加水饱和正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf中一种或几种的对照品，分别加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶6F254薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或正己烷或环己烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇或丙酮-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下层溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％～50％硫酸乙醇试剂，在80℃～160℃烘至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；C、所述注射剂含量的检测方法应包括：a、注射剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量测定：取待测生脉注射制剂适量，置量瓶中，加水或甲醇或流动相或乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1中的一种或几种对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～60℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，待测生脉注射制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为：(1)每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于0.8mg；(2)每单位量含人参皂苷Re的限度不得少于0.4mg；(3)每单位量含人参皂苷Rb1的限度不得少于0.5mg；(4)每单位量含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的总和的限度不得少于1.7mg；b、注射剂中总皂苷的含量测定：取待测生脉注射制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水或甲醇或乙醇适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取适量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛-冰醋酸溶液0.1ml～10ml，高氯酸0.1ml～15ml，摇匀，30℃～80℃水浴上加热3～50分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547±10nm的波长处测定吸收度，以外标法或标准曲线法进行计算，待测生脉注射制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或人参皂苷Re或人参皂苷Rf或麦冬皂苷B或麦冬皂苷D或麦冬皂苷D′计，不得少于10mg；c、注射剂中总多糖含量测定：单糖取待测生脉注射制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水溶解后用氢氧化钠试液调节pH至中性，精密加入0.1mol/L的碘液25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得；每1ml0.1mol/L的碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖，由此计算单糖的含量；总糖取待测生脉注射制剂适量，置碘量瓶中，加蒸馏水使溶解后加稀硫酸25ml，加热回流1～4小时，放冷，加酚酞指示液1～2滴，加氢氧化钠试液至中性，精密加入0.1mol/L碘液25ml，摇匀，逐滴加入氢氧化钠试液4ml，边加边剧烈振摇，密塞，暗处放置10分钟，加稀硫酸4ml，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得；每1ml 0.1mol/L的碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖，以此计算总糖的含量；以总糖的含量减去单糖的含量即得总多糖的含量；待测生脉注射制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总多糖以无水葡萄糖计，不得少于50mg；所述注射剂中的皂苷类、多糖类的全部或部分可测成分的总含量占制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的25％以上。