快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒，涉及一种性传播疾病病原体基因检测试剂盒。本发明主要包括：1)DNA核酸提取液；2)含有三种病原体检测序列的阳性质粒，三种病原体包括沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体；3)一步法单管单酶多项联合检测的TaqManPCR扩增体系。本发明特异性好，灵敏度高，定量准确；检测速度快；使用步骤简单，可重复性高；可同时进行高通量的样品检测；不仅可对沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体进行同步定量检测，并可替代一直沿用的传统的培养法和ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断方法。

主权项

1、一种快速同步检测沙眼衣原体、细小脲原体和解脲脲原体的试剂盒，其特征在于：1)DNA核酸提取液；2)含有三种病原体检测序列的阳性质粒，三种病原体包括沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体；3)一步法单管单酶多项联合检测的TaqMan PCR扩增体系由含有PCR10×buffer，10μmol/L的沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体上下游引物，5μmol/L的沙眼衣原体、细小脲原体以及解脲脲原体的荧光探针，25mmol/LMgCl2，10mmol/L dNTPs mix和无菌双蒸水组成，其中引物和标记探针如下：①沙眼衣原体正向引物为5′-TTCAGTTGGGCCAGATCATG-3′，反向引物为5′-CTCTTCATCGGTGGCTAATGTATAAA-3′；荧光探针序列为5′-AGGCTCGTCCTGACTCATGCATTTCG-3′；荧光探针5′端标记FAM，3′端标记非荧光淬灭基团Eclipse，标准阳性模板pU-CT是含有沙眼衣原体高度保守基因trp基因73个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；②细小脲原体正向引物为5′-CATTGATGTTGCACAAGGAGAAA-3′，反向引物为5′-TTAGCACCAACATAAGGAGCTAAATC-3′；荧光探针序列为5′-TTGACCACCCTTACGAG-3′；荧光探针5′端标记报告荧光基团VIC，3′端标记不发光的淬灭基团标记，并连接小型凹槽结合物-MGB基团，可以大大提高探针的退火温度，标准阳性模板pU-UP是含有细小脲原体高度保守基因-脲酶基因的111个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；③解脲脲原体正向引物为5′-ATCGACGTTGCCCAAGGGGA-3′反向引物为5′-TTAGCACCAACATAAGGAGCTAAATC-3′；荧光探针序列为5′-TTGTCCGCCTTTACGAG-3′；荧光探针5′端标记报告荧光基团TAMRA，3′端标记不发光的淬灭基团标记，并连接小型凹槽结合物-MGB基团。标准阳性模板pU-UU是含有解脲脲原体高度保守mba基因的110个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；