一种快速诊断唐氏综合征的方法

摘要

本发明是一种扩增D21S1440、D21S11和PentaD STR基因座诊断唐氏综合征的方法。该方法是扩增21号染色体D21S1440、D21S11和PentaD STR基因座，测序胶检测扩增产物，通过对扩增产物条带及面积的分析达到诊断唐氏综合征的目的。本发明的方法与染色体核型分析相比具有以下优点：快速；灵敏度、特异度高；取材少；可以对大批量样本同时进行诊断，结果分析省时省力等。应用QF-PCR扩增STR基因座方法快速、精确度高、自动进样和结果数据化等优势，是大规模产前诊断唐氏综合征的理想工具。

主权项

1、一种快速诊断唐氏综合征的方法，其特征在于所述方法包括：(1)用常规方法采集样本，于-20℃保存备用；所述样本是羊水样本、绒毛样本或外周血样本；(2)提取样本中的DNA，其中：外周血样本采用DNA提取试剂盒进行DNA提取；羊水样本或绒毛样本采用盐析法进行DNA提取；(3)选择与合成引物，其中：a.D21S1440引物序列：f-FAM-GAGTTTGAAAATAAAGTGTTCTGC；r-CCCCACCCCTTTTAGTTTTA；扩增产物为157～175bp；b.D21S11引物序列：f-FAM-GTGAGTCAATTCCCCAAG；r-GTTGTATTAGTCAATGTTCTCC；扩增产物为172～260bp；c.Penta D引物序列：f-FAM-GAAGGTCGAAGCTGAAGTG；r-CTTGTGTCCAGATTAAAGAATTCTT；扩增产物为398bp～433bp；(4)PCR扩增以提取的基因组DNA为模板，在9600PCR仪上进行扩增；反应体系为25μL～50μL，其中模板0.2～0.4μL其终浓度0.6ng，dNTPs 0.5μL～1.0μL其终浓度0.2mmol/L，Taq酶0.5μL～1.0μL其终浓度0.04U/μL，10×PCR buffer 2.5μL～5.0μL其终浓度1×PCR buffer，引物f-FAM 0.03μL～0.06μL其终浓度0.12μmol/L，引物r 0.03μL～0.06μL其终浓度0.12μmol/L，最后补充ddH2O至25μL～50μL；(5)PCR扩增产物的检测采用ABI PRISM 377测序电泳、GeneScan 3.1软件及核酸/蛋白凝胶图像分析管理系统分析扩增产物，对电泳条带进行峰面积定量检测。