一种四环素严紧调控的真核表达载体

摘要

一种四环素严紧调控的真核表达载体，其分别引入如下DNA元件：hCMV、rtTA2^S-M2、IRES、EGFP-Puro、编码荧光素酶的元件(Luc)和P_tetbi-RFC，应用于外源性兴趣基因在真核细胞中的表达和筛选。该载体转染后受到Tet或Dox严紧控制，并且基因的表达水平通过加入Tet或Dox的量进行定量调节；通过检测Luc荧光素酶的活性就可以间接检测兴趣基因的表达水平；载体的转染效率可以通过检测绿色荧光细胞的比例来完成；稳定转染的细胞通过流式细胞仪分选，使得确定兴趣基因的表达简洁、方便；而且所筛选得到的稳定细胞系，兴趣基因已经整合于宿主的基因组，具有长期稳定表达的特性和优势。

主权项

1、一种四环素严紧调控的真核表达载体，包括启动子，其特征在于，沿启动子方向分布有编码四环素反应表达框抑制子的rtTA2S-M2和四环素反应表达框，所述的四环素反应表达框包括四环素控制的双向启动子Ptetbi；所述rtTA2S-M2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，Ptetbi的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。