一种高灵敏度的利用基因突变酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法

摘要

本发明公开了一种高灵敏度的利用基因突变酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法。采用的技术方案是：将野生型酿酒酵母细胞内的分子伴侣SSA1基因编码的第483位亮氨酸突变为色氨酸，得到基因突变型SSA1-YS1酵母细胞；然后经SSA1-YS1酵母细胞的活化；初始OD值的调试；制备筛选待测药物检测溶液；从第一天起，隔天提取适量SSA1-YS1酵母细胞悬液稀释后平板涂布；置于24℃恒温培养箱中培养3天，再转入4℃冰箱中培养7天，观察SSA1-YS1酵母细胞的颜色。本发明极大地降低药物筛选过程中的假阴性，不仅待测药物的用量少，而且提高了筛选精确度、降低了筛选成本消耗。

主权项

1、一种高灵敏度的利用基因突变酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法，其特征在于步骤如下：1)SSA1-YS1酵母细胞的制备：将野生型酿酒酵母细胞(Saccharomyces cerevisiae)内的分子伴侣SSA1基因编码的第483位亮氨酸突变为色氨酸，得到基因突变型SSA1-YS1酵母细胞，其菌落颜色为粉色；2)筛选抗朊病毒药物：SSA1-YS1酵母细胞的活化：取SSA1-YS1酵母细胞接入1/2YPD培养液中，30℃振荡过夜培养；SSA1-YS1酵母细胞初始OD值的调试：调制SSA1-YS1酵母细胞悬液OD600＝0.5；筛选待测药物：取无菌冻存管，分别加入待测药物、1/2YPD培养液以及调试好的SSA1-YS1酵母细胞悬液，在24℃的条件下，振荡培养，每天定时取前一天冻存管中的SSA1-YS1酵母细胞放入新的装有1/2YPD培养液和待测药物的无菌冻存管中，振荡培养1～5天；检测：从第一天起，隔天提取100μl前一天的冻存管中的SSA1-YS1酵母细胞悬液，稀释后，在1/2YPD固体培养基的培养皿上涂布；将涂好SSA1-YS1酵母细胞悬液的培养皿置于24℃恒温培养箱中培养3天，再转入4℃冰箱中培养7天，观察SSA1-YS1酵母细胞的颜色。