主权项 |
1、一种产生至少部分基因组的物理图的方法,包括下述步骤:(a)提供样品DNA;(b)产生人工染色体(BAC,YAC)克隆库,其中每个人工染色体克隆包含部分该样品DNA;(c)将所述的人工染色体克隆组合到一个或更多个库中以产生文库,其中每个克隆在一个以上的库中存在;(d)用一个或更多个限制性内切酶消化所述的一个或更多个库以为每个库都提供一组限制性片段;(e)将接头连接到该限制性片段的一边或两边以提供接头连接的限制性片段,其中至少一个接头分别含有库特异性鉴定因子或简并鉴定因子部分;(f)可选地,组合该接头连接的限制性片段;(g)用至少一个引物扩增步骤(e)中的接头连接的限制性片段以提供扩增的接头连接的限制性片段(扩增子),该引物分别含有对应于接头中库特异性鉴定因子部分的库特异性部分或在简并鉴定因子部分的位置含有库特异性鉴定因子;(h)可选地,组合该扩增子成一组组合的扩增子;(i)测定扩增子或组合的扩增子组的至少库特异性鉴定因子的序列和部分限制性片段的序列;(j)使用库特异性鉴定因子将步骤(i)扩增子中测定的限制性片段序列分配到相应克隆中;(k)将同一克隆来源的限制性片段进行排序以建立重叠群;(1)将步骤(k)克隆的重叠群排序,由此建立克隆-重叠群并产生物理图。 |