主权项 |
1. 一种以石榴皮为原料酶法制备鞣花酸的方法,通过单宁酶与鞣花单宁的酶促反应,得到鞣花酸粗产品,经溶剂结晶纯化获得纯鞣花酸,具体步骤和条件为:A鞣花单宁的提取将烘干的石榴皮粉碎后,加入到体积浓度为20~60%的乙醇水溶液中,置于功率为80-100W的超声波作用下超声处理2-3次,每次25-40分钟,得到鞣花单宁的乙醇水溶液,浓缩回收乙醇后,得到鞣花单宁浓缩液;B单宁酶的发酵培养将黑曲霉Aspergillus niger3.316接种于发酵培养基中,25-30℃下培养20-24小时,移至产酶培养基中,在25-30℃下培养4-6天,离心并用去离子水洗涤,获得含单宁酶的菌体,加入pH=5.0的柠檬酸缓冲液得到菌悬液,菌悬液于冰浴中在功率400-600W的超声波作用下进行超声破碎,破碎时间为20-30分钟,得到单宁酶的粗酶液;C酶促转化反应将步骤A得到的鞣花单宁浓缩液,加水稀释至原来体积的1-2倍,用NaOH水溶液调节pH至5.0-5.5,将步骤B得到的粗酶液加入其中,粗酶液与稀释后的鞣花单宁溶液的体积比为1∶2-3,在25-30℃下酶促转化反应40-48小时,反应液经过滤,得到鞣花酸粗产品;D溶剂结晶纯化将步骤C得到的鞣花酸粗产品加入甲醇,在70~80℃温度下萃取3~9小时后,将萃取液浓缩至饱和,降至室温结晶,反应液过滤后,滤饼经水洗、干燥,得到淡黄色鞣花酸产品。 |